遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型致病基因的突變檢測(cè).pdf

1、遺傳性牙本質(zhì)疾病分為遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全(Dentinogenesis imperfecta，DGI)和牙本質(zhì)發(fā)育不良（dentin dysplasia）。DGI分為3型：I型(DGI-I)，患者伴有成骨發(fā)育不全的癥狀；II型(DGI-II)，即傳統(tǒng)所說(shuō)的牙本質(zhì)發(fā)育不全，又名遺傳性乳光牙本質(zhì)；III型(DGI-III)，又名白蘭地型牙本質(zhì)發(fā)育不全，最早發(fā)現(xiàn)于美國(guó)馬里蘭州的3個(gè)隔離民族群中。DD分為2型：I型（DD-I），患者牙齒外表正常

2、，但X線顯示異常；II型（DD-II），乳牙和DGI-II相似，恒牙外表正常，僅在X線下可以異常。
　　目前研究認(rèn)為DGI-II是由于DSPP基因發(fā)生突變而產(chǎn)生的。但不同家系突變位點(diǎn)不同，甚至也有報(bào)道未發(fā)現(xiàn)突變的家系。為進(jìn)一步了解湖北一新發(fā)現(xiàn)的DGI-II家系的致病原因，我們對(duì)該家系進(jìn)行了樣本的采集和DSPP基因的測(cè)序。以了解改家系DSPP啟動(dòng)子和非高度重復(fù)序列編碼區(qū)內(nèi)是否含有致病突變，以及發(fā)生DGI-II疾病的分子機(jī)制。

3、　　1、遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全Ⅱ型家系樣本的采集和基因組的獲取
　　為了進(jìn)一步篩選候選區(qū)域的編碼序列，尋找更多的候選基因，本研究收集了中國(guó)湖北陽(yáng)新的牙本質(zhì)發(fā)育不全I(xiàn)I型家系，一共5代94人(獲得DNA樣本人數(shù)70)?；颊哐例X呈半透明的灰色至黃褐色改變、牙冠呈鈍圓球型、釉質(zhì)剝落，牙本質(zhì)較軟，全口牙磨損明顯，X線顯示髓腔狹窄或閉塞，根管變細(xì)，牙根短，乳、恒牙均受累，但無(wú)成骨不全癥狀，也沒(méi)有聽(tīng)力喪失，確診為DGI-II。本研究成功從患者外

4、周血提取DNA基因組，以供下一步的突變基因檢測(cè)研究使用。
　　2、遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全I(xiàn)I型致病基因的檢測(cè)
　　隨著研究的不斷深入，在部分家系DSPP基因上發(fā)現(xiàn)了多處互不相同的突變。突變主要發(fā)生在DSP上，引起DSPP蛋白表達(dá)的異常、或物理性質(zhì)的改變。為進(jìn)一步了解DSPP在該湖北DGI-II家系中是否存在致病突變，我們采用PCR方法對(duì)DSPP啟動(dòng)子和非高度重復(fù)序列編碼區(qū)進(jìn)行了擴(kuò)增，通過(guò)DNA直接測(cè)序進(jìn)行突變篩查，以試圖在基因

5、水平說(shuō)明其致病原因。
　　檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　?。?）該遺傳性牙本質(zhì)發(fā)育不全I(xiàn)I型家系的牙本質(zhì)涎磷蛋白啟動(dòng)子區(qū)和非高度重復(fù)序列編碼區(qū)未檢測(cè)到與疾病表型相關(guān)的特異性改變。
　?。?）在牙本質(zhì)涎蛋白編碼區(qū)檢測(cè)到不同個(gè)體之間具有多態(tài)性；外顯子4中有2個(gè)SNP多態(tài)，c.847A/G（p.243N/D，rs3750025）、c.1017G/A（rs2736982，p.299S）；外顯子5中c.1447T/C（p.443G）。其中有