Marie Unna型遺傳性稀毛癥致病基因突變篩查及功能研究.pdf

1、研究背景：Marie Unna型遺傳性稀毛癥（MUHH）是臨床上一種罕見的常染色體顯性遺傳性毛發(fā)疾病。該病由德國學(xué)者M(jìn)arie Unna于1925年首次報(bào)道。受累個(gè)體臨床表現(xiàn)為在出生時(shí)毛發(fā)稀少或缺失；在幼童時(shí)期頭發(fā)開始緩慢生長(zhǎng)呈現(xiàn)特有的粗糙、不規(guī)則扭曲和金屬絲樣外觀；從青春期開始，頭發(fā)彌漫性脫落并逐漸加重，脫發(fā)以頭頂部開始，嚴(yán)重者可發(fā)展為禿頭。大部分患者體毛、睫毛、眉毛和第二性征毛發(fā)非常稀少或缺如。患者不伴有其他系統(tǒng)性疾病，男性受累較女

2、性嚴(yán)重。組織病理學(xué)檢查顯示，在毛囊周圍沒有顯著的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)或纖維化，但成熟的毛囊數(shù)量顯著減少、毛囊縮小，毛囊中沒有毛發(fā)。電鏡顯示毛發(fā)不規(guī)則扭曲，出現(xiàn)縱溝、縱裂、不規(guī)則橫斷面、毛小皮廣泛的剝脫和毛鞘異常。MUHH具有遺傳異質(zhì)性，迄今為止，該病已有兩個(gè)致病基因位點(diǎn)分別被定位在8p21和1p21.1–1q21.3上，其中8p21已被多個(gè)研究小組證實(shí)，該區(qū)域包含人無毛基因HR基因。國內(nèi)外多個(gè)研究小組先后對(duì)MUHH患者進(jìn)行HR基因編碼區(qū)的突變分

3、析，然而均未檢測(cè)到HR基因突變。在HR基因5′非翻譯區(qū)有4個(gè)上游開放閱讀框架（uORF），從5′→ 3′分別命名為U1HR,U2HR,U3HR以及 U4HR，其中U2HR是HR基因的的一個(gè)抑制性u(píng)ORF，直接比鄰HR基因編碼區(qū)的引導(dǎo)序列，編碼一種由34個(gè)氨基酸組成的小分子多肽。近來，在一個(gè)中國漢族MUHH大家系的HR基因的U2HR區(qū)域鑒定了一個(gè)致病的起始密碼突變并在其他18個(gè)祖先來源不同的MUHH家系中共發(fā)現(xiàn)了12個(gè)U2HR突變，建立了

4、U2HR的突變?nèi)毕葑V。功能研究顯示這些不同的突變都導(dǎo)致下游HR基因mORF生理?xiàng)l件下翻譯效率增強(qiáng),引起HR蛋白過表達(dá)。
　　 目的：⑴分析3個(gè)中國MUHH家系及4個(gè)散發(fā)患者的臨床特征；⑵檢測(cè)中國漢族人MUHH患者HR基因的U2HR基因突變，分析MUHH的突變篩查結(jié)果，以期獲得更多的基因型和表型的相關(guān)信息并進(jìn)一步驗(yàn)證遺傳性疾病的新的發(fā)病機(jī)理；⑶分析HR基因mRNA表達(dá)水平和蛋白表達(dá)水平變化，以期獲得更多的U2HR突變對(duì)HR基因表達(dá)

5、影響的新信息。
　　 方法：①采用家系調(diào)查、組織病理學(xué)檢查和掃描電鏡檢查分析MUHH患者的臨床表現(xiàn)；②采用PCR反應(yīng)擴(kuò)增HR基因的U2HR區(qū)域，用直接測(cè)序法對(duì)1個(gè)中國MUHH家系及4個(gè)散發(fā)MUHH患者進(jìn)行U2HR的基因突變檢測(cè)；③通過Pubmed及中國醫(yī)學(xué)光盤CBM,對(duì)MUHH基因突變報(bào)道進(jìn)行總結(jié)；④采用Real-Time PCR的方法分析有突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者和健康對(duì)照外周血單一核細(xì)胞中HR基因mRNA表達(dá)

6、水平變化；⑤采用Western-blot的方法分析有突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者和健康對(duì)照之間蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化。
　　 結(jié)果：⑴MUHH的遺傳模式為常染色體顯性遺傳，所有患者未見表型差異，未能發(fā)現(xiàn)基因型和表型之間的明確相關(guān)性；⑵在一例散發(fā)MUHH患者HR基因U2HR中檢測(cè)到1個(gè)錯(cuò)義突變c.77A>C (p.E26A)。在該患者的健康父親及100例正常對(duì)照中均不存在上述突變；⑶HR基因mRNA水平相對(duì)表達(dá)結(jié)果顯示，有

7、突變的MUHH患者、無突變的MUHH患者及健康對(duì)照之間均無顯著性差異；⑷Western-blot結(jié)果顯示，有突變的MUHH患者外周血單一核細(xì)胞中的HR蛋白質(zhì)水平的相對(duì)表達(dá)較健康對(duì)照顯著增高。
　　 結(jié)論：①本研究利用直接測(cè)序的方法在1個(gè)中國MUHH家系及4個(gè)散發(fā)病例中共檢測(cè)出HR基因的U2HR的1個(gè)新的錯(cuò)義突變（c.77A>C），豐富了U2HR基因突變譜；總結(jié)了MUHH突變篩查結(jié)果，推測(cè)U2HR的突變熱點(diǎn)可能位于U2HR的第24