堅強芽孢桿菌抗菌代謝產物的研究.pdf

1、本試驗主要是對堅強芽孢桿菌代謝產物的產生條件，抗菌機制，抗菌成分進行了較為深入的探索。 1、本試驗對培養(yǎng)基和生長條件的研究可以看出：將CM，NYDA，LB，NB，J式培養(yǎng)基做為基礎培養(yǎng)基進行第一次篩選后，通過生物測定顯示，NB培養(yǎng)基可以作為最優(yōu)基礎培養(yǎng)基；然后在此基礎上，通過搖瓶正交試驗分析了不同碳、氮源以及溫度、pH、溶氧量對堅強芽孢桿菌產代謝產物影響的顯著性差異，最終確定了最佳培養(yǎng)基配方和最優(yōu)生長條件為牛肉膏8g，蛋白胨10

2、g，葡萄糖14g；最優(yōu)生長條件為PH值7.5，溶氧量取150 ml培養(yǎng)液于300 ml三角瓶中振蕩培養(yǎng)，最適溫度為35℃。經最優(yōu)培養(yǎng)基培養(yǎng)Bacillius.firmus后分離到的無菌代謝產物對指示菌的抑菌率達到79％以上，且在病原菌培養(yǎng)時間內不產生分生孢子。通過對生長曲線和代謝產物抗菌活性曲線的測定結果表明，在培養(yǎng)60小時時，堅強芽孢桿菌的菌量和代謝產物的抗菌活性達到最大；一般來說，培養(yǎng)時間不能超過72小時，因為此時無論是菌量的多少或

3、是代謝產物的產出都開始進入衰退期，不利于代謝產物的提取與利用。 2、通過抗菌代謝產物對指示菌枯斑擬盤多毛孢菌絲與分生孢子的作用可以看出，該抗菌物質的作用機制主要是以溶菌和拮抗作用為主。試驗結果顯示，該代謝產物可以使病原菌菌絲顏色加深，壁加厚，菌絲隔膜增加，每一段形狀變?yōu)槟钪闋罨驒E圓形，以菌絲分枝變形最為嚴重，大多數膨大為囊狀，內部形成球狀顆粒，甚至破碎、裂解，內部原生質溢出，使菌絲變?yōu)榭諝?。使病原菌的分生孢子不萌發(fā)，胞壁明顯變薄

4、，特別是萌發(fā)胞，首先是開始膨大，細胞壁較其他兩節(jié)細胞薄，然后完全變成泡囊狀：有些分生孢子的第一節(jié)細胞也同時膨大為泡囊狀，細胞壁很薄；在代謝產物處理48小時后，分生孢子的萌發(fā)胞普遍破裂，第一節(jié)細胞壁也陸續(xù)裂解，內部原生質外溢?？咕V的試驗結果表明，堅強芽孢桿菌的抗菌代謝產物具有廣譜高效的抗菌作用，針對各種各樣的病原真菌都有很明顯的抑制作用。除了對接合菌亞門的總狀毛霉沒有抗菌活性以外，對所有應試病原菌都顯示出一定的抗菌活性。其中，對子囊菌亞

5、門的核盤菌抗菌效果最佳，病原菌在含藥平板上完全不生長；對半知菌亞門的桂花爛皮菌抑菌效果最差，但是抑菌率也達到了40％以上。 3、試驗通過硫酸銨分級沉淀法，透析法，離子交換層析法，十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺疑膠電泳(SDS-PAGE)對抗菌代謝產物的基本性質和分子量做了深入探索。試驗結果顯示，代謝物質在不同飽和度的硫酸銨作用下，都會不同程度的產生沉淀，沉淀比重較小，漂浮于液面，棕色，隨著硫酸銨飽和度越大，得到的蛋白質抗菌活性和蛋白質

6、含量同時增大，但是當硫酸銨飽和度到達70％時，抗菌活性與蛋白質含量到達頂峰。該沉淀物質經透析后仍然具有抗菌活性，對紫外線和氯仿基本穩(wěn)定，對高溫和酸的耐受性不強，對胰蛋白酶不敏感，對蛋白酶K部分敏感。以離子交換層析后分離出三個峰的樣品，通過生物測定確定僅有一個峰的樣品具有抗菌活性，SDS-PAGE后，結果表明只有具有生物活性的樣品產生了一條清晰的譜帶，但顏色較Marker淡。經過將譜帶的位置與Protein Marker，middle所形