蝦（Penaeus Vannamei）過敏原免疫活性的研究.pdf

1、蝦是人類最優(yōu)質(zhì)動(dòng)物蛋白的來源之一，也是八大類容易引起過敏的食物之一。隨著國際貿(mào)易的發(fā)展，其在食品中的應(yīng)用越來越廣泛，食用蝦引起過敏的潛在危害更值得重視。本論文主要從蝦過敏原蛋白的分離純化、抗體的制備、免疫檢測、不同因子對其免疫活性的影響以及蝦過敏的診斷等方面進(jìn)行研究，得到如下結(jié)論。 1．不同患者對蝦中過敏原蛋白的識別不同，試驗(yàn)共識別到8個(gè)條帶，其中識別率最高的是分子量為36kD的原肌球蛋白，超過80％的患者血清IgE能夠與其反應(yīng)

2、，其次是分子量在85kD的蛋白，除此之外，52kD、41kD、31kD、30kD、22kD的蛋白也都有識別。對不同品種的蝦的免疫識別發(fā)現(xiàn)，雖然蝦抽提物的蛋白組分稍有差別，但主要過敏原均為分子量為36kD的原肌球蛋白，其免疫活性沒有明顯的差別。 2．建立了蝦過敏原蛋白活性檢測的Dot-ELISA技術(shù)體系；利用純化的蝦過敏原蛋白作為抗原分別獲得鼠源和兔源的效價(jià)為160,000和80,000的抗體。在實(shí)驗(yàn)中，本論文首次采用S180細(xì)胞

3、刺激經(jīng)過3次加強(qiáng)免疫的小鼠產(chǎn)生腹水，成功的獲得了效價(jià)為40,000的蝦過敏原蛋白抗體，經(jīng)過純化后的抗體效價(jià)提高2倍以上，且對蝦過敏原蛋白具有特異性。 3．以獲得的鼠源抗體為一抗，建立了間接競爭酶聯(lián)免疫檢測蝦過敏原蛋白的方法，檢測限為1.85ng／mL，線性檢測范圍為4.79-1400ng／mL，板內(nèi)變異系數(shù)為3.4％～9.1％，板間變異系數(shù)在12.9％～19.6％，達(dá)到了國際同類產(chǎn)品的水平。 4．以鼠源抗體為捕獲抗體，膠

4、體金標(biāo)記的兔源抗體為檢測抗體，制備了蝦過敏原蛋白檢測的免疫滲濾試劑盒，檢測限達(dá)到250ng／ml，檢測時(shí)間在15min之內(nèi)，達(dá)到了快速、簡便、特異性的要求，但仍需進(jìn)一步提高靈敏度。 5．本試驗(yàn)首次采用超聲波處理蝦過敏原蛋白，結(jié)果表明，在一定的條件下，超聲波能夠降低蝦過敏原蛋白的免疫活性。在0℃的條件下，超聲波處理無論對于蝦抽提物還是蝦肉都沒有明顯的影響。但在50℃條件下，超聲波處理蝦抽提物的IC<,50>值比未經(jīng)處理的增大了10

5、倍。而超聲波處理的蝦肉其過敏原蛋白的IC<,50>值更是從0.7gg/mL增加到11μg/mL,這說明在50℃條件下超聲波處理能夠降低蝦過敏原蛋白的免疫活性,是一種有效降低蝦過敏原蛋白免疫活性的方法。當(dāng)然這種結(jié)果還需要進(jìn)一步的臨床實(shí)驗(yàn)來證實(shí)。 6.輻照可以導(dǎo)致蝦過敏原蛋白免疫活性的變化,當(dāng)輻照劑量低于10kGy時(shí),處理的蝦抽提物和蝦肉的免疫活性有稍微增加;當(dāng)輻照劑量大于10kGy時(shí),蝦過敏原蛋白的免疫活性下降。輻照和加熱聯(lián)合作用可以顯