RAD001對(duì)PIK3CA基因及KRAS基因不同類型人肺NSCLC細(xì)胞放射增敏作用研究.pdf

1、目的：探討mTOR 蛋白抑制劑RAD001在NSCLC 放療中的作用，研究其放射增敏作用與PIK3CA基因和KRAS基因狀態(tài)的關(guān)系。
　　 方法：體外培養(yǎng)EGFR 野生型酪氨酸激酶抑制劑（TKI）耐藥的人肺非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株，其中NCI-H661細(xì)胞為PIK3CA和KRAS基因雙野生型，NCI-H460細(xì)胞為PIK3CA和KRAS基因雙突變型。應(yīng)用MTT 法分別檢測(cè)RAD001 對(duì)兩株細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50），確定藥物增敏

2、劑量。應(yīng)用RAD001 作用24h后聯(lián)合及單獨(dú)進(jìn)行X線0、2、4、6、8Gy 照射，分別計(jì)算兩株細(xì)胞克隆存活分?jǐn)?shù)，多靶單擊模型擬合生存曲線，計(jì)算D0、Dq、SF2 及SER 參數(shù)。應(yīng)用免疫熒光共聚焦分別觀察兩株細(xì)胞RAD001干預(yù)組及單純照射組X線4Gy 照射后0m、30m、60m、4h、12h、24hγ-H2AX 蛋白表達(dá)變化情況。應(yīng)用western blot 進(jìn)行p-p70S6K 及γ-H2AX 蛋白檢測(cè)及灰度值定量。
　　

3、 結(jié)果：MTT 法檢測(cè)RAD001 對(duì)兩株細(xì)胞的半抑制濃度(IC50)分別為：NCI-H661(23.101±0.056)nM和NCI-H460 (61.894±0.049)nM，經(jīng)加權(quán)概率法分析存在顯著性差異(p＜0.05)。NCI-H661細(xì)胞單純照射組及RAD001 干預(yù)組D0、Dq、SF2分別為2.244，1.927，0.712 及1.596，1.369，0.548，SER 為1.406。NCI-H460細(xì)胞單純照射組及RAD0

4、01干預(yù)組D0、Dq、SF2分別為2.412，2.894，0.851 及2.359，1.848，0.706，SER 為1.022。
　　 免疫熒光共聚焦顯微鏡檢測(cè)顯示NCI-H661細(xì)胞RAD001 干預(yù)組24h 時(shí)間點(diǎn)γ-H2AX焦點(diǎn)殘留增多，NCI-H460細(xì)胞中未發(fā)現(xiàn)類似改變。RAD001 作用24h后兩株細(xì)胞p-p70S6K 蛋白表達(dá)量均較未加藥組降低。NCI-H661細(xì)胞RAD001 干預(yù)組較單純照射組24h 時(shí)間點(diǎn)γ