乳腺癌組織中PIK3CA、KRAS及BRAF基因突變熱點(diǎn)區(qū)域的序列分析.pdf

1、乳腺癌是全球女性最常見的惡性腫瘤之一,嚴(yán)重影響女性的身心健康甚至危及生命,隨著細(xì)胞生物學(xué)及分子生物理論和技術(shù)的發(fā)展,現(xiàn)已認(rèn)識(shí)到基因突變?cè)谌橄侔┑陌l(fā)生、發(fā)展過程中起著非常重要的作用。目前已證實(shí)多種基因在乳腺癌的早期診斷及預(yù)后判斷等方面有著重要的意義。
　　PIK3CA是PI3Ks家族的關(guān)鍵成員,是染色體3q26.3上一段長度為34 kb的基因,由20個(gè)外顯子組成,編碼1068個(gè)氨基酸組成的p110α催化亞單位。PIK3CA基因是一種

2、癌基因,在多種人類腫瘤中存在突變。近幾年來已有數(shù)篇報(bào)道指出PIK3CA基因在結(jié)腸癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、肝癌等多種腫瘤中發(fā)生了高頻體細(xì)胞突變。研究發(fā)現(xiàn)PIK3CA基因突變,是除了HER2基因擴(kuò)增、p53基因突變之外乳腺癌最常見的基因突變之一。
　　KRAS基因是RAS家族的成員之一,位于12號(hào)染色體短臂上,長度為35 kb,是表皮生長因子受體的下游分子,KRAS基因含有4個(gè)編碼外顯子和1個(gè)5’端非編碼外顯子,共同編碼含有189個(gè)

3、氨基酸組成的RAS蛋白,在RAS基因家族中,KRAS對(duì)人類惡性腫瘤的影響最大,約30％的人類腫瘤中檢測(cè)到了RAS基因的突變。
　　BRAF基因是在人類尤文氏肉瘤中發(fā)現(xiàn)并克隆確認(rèn)的能傳染NIH3T3細(xì)胞并且具有活性的DNA序列,位于7q34染色體,長度約190 kb,有功能的編碼區(qū)由2150對(duì)堿基組成,該基因是 Ras-Raf-MEK-ERK信號(hào)轉(zhuǎn)到通路非常重要的轉(zhuǎn)導(dǎo)因子,人類惡性腫瘤中約有7%-8%發(fā)生了 BRAF基因突變,其突變

4、位點(diǎn)主要位于第11和第15外顯子上,最常見的是V600E突變。近年來研究表明,BRAF基因的突變狀態(tài)能夠預(yù)測(cè)且對(duì)抗EGFR治療產(chǎn)生影響,從而影響到乳腺癌患者的預(yù)后情況,BRAF基因可作為乳腺癌研究中一個(gè)非常重要的靶點(diǎn)。
　　迄今為止,對(duì)于乳腺癌基因突變的研究大多是針對(duì)西方高加索人群,而對(duì)中國乳腺癌患者的基因突變的研究較少。然而,腫瘤的發(fā)生是一個(gè)多因素、多階段、多基因變異累計(jì)的復(fù)雜過程,基因的突變頻率、突變位點(diǎn)在不同種族,不同人群中

5、也存在著一定的差異,因此,本研究旨在對(duì)中國女性乳腺癌組織中PIK3CA、KRAS、BRAF基因突變熱點(diǎn)區(qū)域的檢測(cè),分析這三種基因突變熱點(diǎn)區(qū)域的突變情況。
　　本研究針對(duì)從淮北市礦工總醫(yī)院收集來的女性乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行基因組DNA的提取,分別對(duì)PIK3CA基因、KRAS基因、BRAF基因突變熱點(diǎn)區(qū)域進(jìn)行PCR擴(kuò)增,并對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序分析,得到結(jié)果:本研究所搜集的26例乳腺癌患標(biāo)本中發(fā)現(xiàn):1、8例 PIK3CA基因的突變,突變頻率為30

6、%。第9外顯子的突變1例(G1633A);第20外顯子的突變7例(A3140G),其中1例在A3140G突變的同時(shí)還發(fā)現(xiàn)了一個(gè)新的突變位點(diǎn)A3134C。2、6例KRAS基因突變,突變頻率為23%,突變位點(diǎn)均位于 KRAS基因熱點(diǎn)突變區(qū)域第2外顯子C100A。3、5例BRAF基因突變,突變頻率為19%,突變位點(diǎn)均位于BRAF基因熱點(diǎn)突變區(qū)域第15外顯子G1808C。4、其中有1例侵潤性導(dǎo)管癌的組織標(biāo)本中同時(shí)出現(xiàn)了PIK3CA基因突變和KR