RAD001聯(lián)合唑來膦酸治療肺腺癌骨轉(zhuǎn)移的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：骨轉(zhuǎn)移是目前晚期肺癌最主要的轉(zhuǎn)移方式之一，已經(jīng)成為肺癌臨床診療中的重要負(fù)擔(dān)。唑來膦酸是目前治療骨轉(zhuǎn)移的主要藥物之一，能夠顯著延緩由骨轉(zhuǎn)移引起的骨相關(guān)事件，同時(shí)唑來膦酸有一定的抗腫瘤作用。RAD001（依維莫司）是繼雷帕霉素后新一代mTOR抑制劑，目前已證實(shí)在多種腫瘤中具有明顯的抗腫瘤作用。本研究通過聯(lián)合唑來膦酸和RAD001兩種藥物，通過細(xì)胞和動(dòng)物水平探討兩種藥物的抗腫瘤的協(xié)同作用。
　　 方法：⑴用RAD001、唑來膦酸

2、、RAD001 聯(lián)合唑來膦酸分別處理具有不同骨轉(zhuǎn)移潛能的肺癌細(xì)胞株A549、H460、SPC-A1，采用四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測細(xì)胞增殖情況；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化及細(xì)胞凋亡率；Western-Blotting 方法比較p70S6K、p-p70S6K 蛋白的變化。⑵將人肺腺癌高骨轉(zhuǎn)移細(xì)胞株SPC-A-1BM 接種于40 只等體重的BALB/c 裸小鼠左心室，制成骨轉(zhuǎn)移瘤模型。40 只荷瘤小鼠隨機(jī)分為四組，每組10 只。接種后第

3、4 天開始用藥，分別為唑來膦酸、RAD001、唑來膦酸聯(lián)合RAD001 和生理鹽水對(duì)照，共用藥3 周。每個(gè)小鼠每周稱體重2 次,記錄生存情況。至第7 周放血處死小鼠，留取血清樣本，ELISA法檢測血清I 型膠原氨基末端肽（NTX）水平；骨ECT 核素掃描、X 線攝片，檢測骨轉(zhuǎn)移部位和數(shù)量；病理切片檢查；留取骨轉(zhuǎn)移病灶，行轉(zhuǎn)移灶Western-Blotting 檢查，通路分子p70S6K、p-p70S6K 在不同用藥組中的表達(dá)情況。

4、>　　 結(jié)果：RAD001 與唑來膦酸聯(lián)合較單藥唑來膦酸或RAD001 能夠顯著抑制A549、H460、SPC-A1 三組細(xì)胞株的增殖。流式細(xì)胞檢測顯示，各腫瘤細(xì)胞在聯(lián)合用藥干預(yù)后早期細(xì)胞凋亡率明顯上升。聯(lián)合用藥組被阻滯在G0-G1 期的細(xì)胞明顯增多。Western-Blotting 顯示聯(lián)合用藥組較單藥組對(duì)p-p70S6K 抑制作用明顯，而對(duì) p70S6K 的抑制作用較單藥組抑制差異不顯著。聯(lián)合治療組和RAD001 組最早出現(xiàn)體重下

5、降，唑來膦酸組和對(duì)照組體重先升后降，聯(lián)合組和RAD001 組死亡時(shí)小鼠體重與唑來膦酸組和對(duì)照組相比，體重差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（死亡平均體重：聯(lián)合組13.73 g，RAD001 組 14.38g, 唑來膦酸組 16.24g ,對(duì)照組 16.63g，P=0.00）.聯(lián)合組生存時(shí)間最長，中位生存時(shí)間為42 天，RAD001 組其次，為41 天，唑來膦酸組中位生存時(shí)間為34 天，對(duì)照組生存時(shí)間為29 天。聯(lián)合組與對(duì)照組生存時(shí)間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.

6、00）。首次核素顯像顯示：治療組(聯(lián)合組及RAD001 組)與對(duì)照組相比骨轉(zhuǎn)移均有顯著差異（p＝0.017）,但唑來膦酸組和對(duì)照組無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.348）；X 線結(jié)果顯示，對(duì)照組骨轉(zhuǎn)移數(shù)量最多，其次為唑來膦酸組，RAD001 組和聯(lián)合組骨轉(zhuǎn)移數(shù)量最少，但組間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.118 ）。骨轉(zhuǎn)歸生物標(biāo)記物－I 型膠原氨基末端肽(NTX)檢測：唑來膦酸組、聯(lián)合組降低了NTX 水平，而以聯(lián)合組與對(duì)照組有顯著差異（p＝0.026