唑來膦酸及其與多西他賽聯合運用對前列腺癌PC-3細胞體外作用的實驗研究.pdf

1、目的和研究背景：
　　前列腺癌是男性泌尿生殖系統(tǒng)常見腫瘤之一，在美國占男性腫瘤死亡率第二位，近年來在我國的發(fā)病率和死亡率也是逐年升高。前列腺癌是對雄激素依賴的腫瘤，所以大多數前列腺癌患者剛開始對于祛除雄激素治療有效，但約50％-60％患者在接受內分泌治療后的18-24個月后會轉變成為激素難治性前列腺癌(Hormonerefractoryprostatecancer，HRPC)。
　　而HRPC患者骨轉移的發(fā)生率高達65-75

2、％，骨是最易產生遠處轉移的組織。唑來膦酸(zoledronicacid，ZOL)是目前唯一被證實能減少前列腺癌骨轉移以及骨相關事件發(fā)生率，并能持久緩解疼痛的雙磷酸鹽藥物。通過研究發(fā)現，唑來膦酸不但能通過抑制破骨細胞的活動和增殖，對抗腫瘤細胞的骨轉移，還有直接抑制腫瘤細胞生長的作用(乳腺癌、骨肉瘤等腫瘤細胞)。目前，晚期前列腺癌患者的治療一直是困擾臨床泌尿外科的一個難題，而唑來膦酸對腫瘤細胞的增殖抑制作用的特性，無疑為臨床治療HRPC患者

3、提供了新的思路，它與目前公認的HRPC一線化療藥物多西他賽(docetaxel，DOC)聯合應用能否產生協(xié)同作用更加成為了人們關注的課題。
　　目前國內外相關領域的研究尚處于基礎研究階段。國外部分研究已證實，唑來膦酸主要通過甲羥戊酸途徑起到抗腫瘤的作用。而對唑來膦酸和多西他賽聯合用藥的基礎研究則更少。兩者聯合運用于乳腺癌細胞的研究提示其具有協(xié)同抗腫瘤作用，而對于前列腺癌的作用在最新的腫瘤學雜志上也開始出現零星的報道(ActaOnl

4、ocogia)，但資料還是非常有限。
　　本研究的目的正是為進一步驗證唑來膦酸對激素非依賴性前列腺癌PC-3細胞系的抗腫瘤作用，同時探討唑來膦酸與多西他賽聯合應用于PC-3細胞是否具有協(xié)同作用，并通過對被抑制腫瘤細胞的細胞周期分布的影響，來揭示其抗腫瘤作用的可能機制，為臨床治療提供理論依據。
　　方法和結果：
　　1.MTT比色法觀察ZOL對前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用
　　本部分研究用不同濃度的ZOL(6

5、.25μg/m1-400μg/ml)作用于體外培養(yǎng)的PC-3細胞，藥物作用2小時后，換正常細胞培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，在72小時后采用噻唑蘭(MTT)比色法檢測細胞增殖活性。結果表明，ZOL可以顯著抑制PC-3細胞的增殖，這種作用隨著藥物濃度的增加而增強。在100μg/ml的濃度下，PC-3細胞抑制率達到19.0％，在200μg/ml濃度下抑制率達到44.5％，而400μg/ml濃度時則達到了57.9％。光鏡下觀察到細胞濃度明顯降低。
　

6、　2.MTT比色法觀察ZOL與DOC聯合應用對前列腺癌PC-3細胞的增殖抑制作用
　　本部分研究采用不同濃度的ZOL(藥物作用2小時)與10ng/ml、100ng/ml濃度下DOC(藥物作用24小時)聯合作用于體外培養(yǎng)的PC-3細胞，換正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48小時后采用噻唑蘭(MTT)比色法檢測細胞增殖活性。結果表明，ZOL與DOC具有聯合抑制細胞增殖的作用，在DOC濃度條件不變情況下，這種增殖抑制作用隨著ZOL藥物濃度的增加而增強

7、。在10ng/ml濃度DOC條件時，200μg/ml濃度ZOL可抑制49.3％的PC-3細胞，400μg/ml時抑制率達到61.4％：在100ng/ml濃度的DOC條件時，200μg/ml濃度ZOL的細胞抑制率達到59.7％，400μg/ml時抑制率達到74.2％。光鏡下細胞密度明顯降低，且伴有細胞質減少的表現。
　　3.流式細胞儀檢測PC-3細胞周期的分布變化
　　本部分研究將PC-3細胞接種于6孔板內培養(yǎng)，過夜貼壁后，用

8、不同濃度的ZOL作用2h，換正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)72h。胰酶消化處理后收集離心，放入70％冰乙醇后制成單細胞懸液，采用流式細胞儀分析細胞周期分布及細胞凋亡率。結果發(fā)現前列腺癌PC-3細胞的自然凋亡率為0.73％，G1、S、G2期的細胞比例分別是61.2％、36.61％、2.13％。經過400μg/mlZOL處理后的細胞凋亡率是5.93％，G1、S、G2期的細胞比例分別是45.71％、48.45％、5.83％。經過ZOL處理后細胞凋亡增加，

9、而G1期細胞明顯減少，S期細胞明顯增加，G2期細胞有所增加。
　　結論：
　　本實驗通過對ZOL、DOC作用前列腺癌PC-3細胞后的細胞增殖活性觀察以及細胞周期的分布變化情況，驗證了ZOL對非雄激素依賴性前列腺癌PC-3細胞具有明顯的增殖抑制作用，誘導細胞凋亡，并能使PC-3細胞出現細胞周期停滯在S期以及G2期。且這種作用與ZOL的濃度呈正相關的關系。研究同時發(fā)現唑來膦酸與多西他賽聯合作用于PC-3細胞較唑來膦酸或者多西他賽