原花青素體外對前列腺癌PC-3細(xì)胞作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、前列腺癌(prostate cancer，PCa)是危害男性健康的一種嚴(yán)重疾病，對前列腺癌的治療至今尚無有效手段，傳統(tǒng)的放療、化療及手術(shù)不能解決腫瘤的轉(zhuǎn)移及腫瘤由激素依賴性轉(zhuǎn)向非依賴性的問題。原花青素(procyanidins，PC)是一種多酚類化合物，存在于葡萄籽、山楂、松樹皮等天然植物中，有高效的抗氧化、降血壓、抗腫瘤、抑制細(xì)菌生長等生物學(xué)活性，并以其高效、低毒、高生物利用度的特點(diǎn)倍受關(guān)注。原花青素對人口腔癌、皮膚癌、乳腺癌、胰腺癌

2、、肝癌、胃癌、結(jié)腸癌等有一定的預(yù)防或治療作用，而對人雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞的作用至今尚無相關(guān)報(bào)道。所以本論文進(jìn)行了如下研究： 1.運(yùn)用噻唑藍(lán)(MTT)比色法測定了原花青素對PC-3細(xì)胞生長的抑制作用，結(jié)果顯示100～300 μg／ml花青素與Pc-3細(xì)胞作用24～72 h，原花青素顯著抑制Pc-3細(xì)胞生長，并呈時(shí)間．劑量效應(yīng)關(guān)系。 2．采用倒置顯微鏡觀察、HE染色以及透射電鏡觀察原花青素對PC-3細(xì)胞作用

3、引起的形態(tài)學(xué)改變。采用不同濃度的原花青素作用PC-3細(xì)胞后，倒置顯微鏡下可見細(xì)胞變圓，細(xì)胞膜透亮，貼壁能力下降，出現(xiàn)漂浮細(xì)胞，表明原花青素使細(xì)胞分裂減少，細(xì)胞生長受抑制。HE染色后光鏡下觀察可見細(xì)胞皺縮變圓、變小，出現(xiàn)多核細(xì)胞，核質(zhì)比增大，異染色質(zhì)增多。透射電鏡下分析細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)，經(jīng)原花青素作用的Pc-3細(xì)胞可見細(xì)胞明顯水腫，胞膜不完整，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)有大量空泡，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)空泡化，核膜水腫，高劑量原花青素作用后可見質(zhì)膜、核膜破碎，線粒體嵴消失，細(xì)

4、胞器外溢。 3．運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)，采用PI染色法和Annexin V-FITC／PI雙染法，觀察不同濃度原花青素誘導(dǎo)Pc-3細(xì)胞凋亡的作用。PI染色法結(jié)果顯示，原花青素能將PC-3細(xì)胞周期阻滯在Go／G1期；Annexin V-FITC／PI雙染果顯示，300μ/m1原花青素作用6h誘發(fā)42.05％PC-3細(xì)胞凋亡；300μg／ml原花青素作用24h誘發(fā)44.86％的細(xì)胞凋亡；300μg／ml原花青素作用48 h引起94.37％的

5、細(xì)胞壞死，表明原花青素具有誘導(dǎo)Pc-3細(xì)胞凋亡和壞死的作用。 4．通過羅丹明123染色檢測原花青素對Pc-3細(xì)胞線粒體膜電位(△ψm)的影響。100μg/m1原花青素作用24h可以使弱熒光細(xì)胞百分率顯著增多，由32.57％N增至84.70％；300μg／m1原花青素作用24 h為87.3％。表明原花青素可降低PC-3細(xì)胞線粒體膜電位。 本研究從細(xì)胞和亞細(xì)胞水平研究了原花青素對前列腺癌PC-3細(xì)胞的作用。通過細(xì)胞生長實(shí)