醉椒素對人前列腺癌PC-3細(xì)胞生長的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、醉椒素(Kavain)是從胡椒科植物卡瓦胡椒中提取出來的活性成分，是α-吡喃酮類化合物，具有調(diào)節(jié)雙向神經(jīng)遞質(zhì)，抗抑郁焦慮、抗驚厥、鎮(zhèn)靜催眠、局部麻醉等多種作用，近十年研究發(fā)現(xiàn)，Kavain還具有抗腫瘤活性，但作用機(jī)制尚不清楚。本文采用體外實(shí)驗(yàn)篩選Kavain對多種抗腫瘤細(xì)胞的抑制作用，并進(jìn)一步研究了Kavain對敏感細(xì)胞株人前列腺癌PC-3細(xì)胞周期和凋亡機(jī)制的影響。
　　 1.Kavain體外抗腫瘤作用
　　 五種腫瘤細(xì)

2、胞（人宮頸癌Hela細(xì)胞，人前列腺癌PC-3細(xì)胞，人食管癌EC9706細(xì)胞，人胃癌SGC-7901細(xì)胞，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞）經(jīng)過6.25、12.5、25、50、100μg/ml的Kavain分別作用24，48，72h后，采用MTT法檢測5種腫瘤細(xì)胞的抑制率并計(jì)算IC50，選擇對Kavain的敏感細(xì)胞株進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，Kavain對人前列腺癌PC-3細(xì)胞有明顯的抗腫瘤活性，對其他4種腫瘤細(xì)胞抗腫瘤活性稍弱;而且不同濃度的Kavai

3、n可不同程度的抑制PC-3細(xì)胞的生長。通過倒置顯微鏡從形態(tài)學(xué)上觀察Kavain對各種腫瘤細(xì)胞的作用，結(jié)果表明，Kavain在50μg/ml時對人前列腺癌PC-3細(xì)胞有明顯的抑制作用，從微觀上觀察到PC-3細(xì)胞在形態(tài)上有明顯的變化。采用流式細(xì)胞儀檢測Kavain對PC-3細(xì)胞周期的變化影響。結(jié)果表明，藥物作用細(xì)胞24 h后，藥物濃度為50μg/ml時，G0/G1期細(xì)胞增加到73.62％，于對照組的49.96％相比，S期細(xì)胞由到對照組的31

4、.1％減少到22.91％，G2/M期細(xì)胞有一定的減少?？芍狵avain誘導(dǎo)人前列腺癌PC-3細(xì)胞于G0/G1期阻滯，并且具有濃度依賴性。通過Annexin V-FITC/PI雙染法檢測Kavain對PC-3細(xì)胞凋亡的影響，結(jié)果表明隨著藥物濃度的升高，人前列腺癌PC-3細(xì)胞早期凋亡率和晚期凋亡率都有明顯增加，證實(shí)了Kavain能夠誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞的凋亡，且具有明顯的濃度依賴性。
　　 2.Western-blot法檢測Kavain

5、對人前列腺癌PC-3細(xì)胞凋亡蛋白caspase-9，caspase-3，Bcl-2，Bax表達(dá)的影響
　　 Western-Blot法檢測Kavain作用人前列腺癌PC-3細(xì)胞24h后Caspase-3，Caspase-9，Bcl-2，Bax蛋白水平的表達(dá)。通過0，12.5，25，50μg/mL的Kavain作用PC-3細(xì)胞24h后，Caspase-3，Caspase-9，Bax蛋白的表達(dá)被上調(diào)，Bcl-2蛋白的表達(dá)水平被下調(diào)。

6、分析結(jié)果，Kavain可能是通過上調(diào)Caspase-3，Caspase-9，Bax蛋白，下調(diào)Bcl-2蛋白而阻滯細(xì)胞周期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)生。
　　 3.Kavain的細(xì)胞動力學(xué)研究
　　 人前列腺癌PC-3細(xì)胞經(jīng)過12.5μg/ml的Kavain分別作用15、30、60、120、240、480min后進(jìn)行細(xì)胞攝取的研究，對細(xì)胞進(jìn)行處理并用高效液相色譜法檢測細(xì)胞內(nèi)藥物的含量。結(jié)果顯示在一定時間內(nèi)，細(xì)胞內(nèi)的藥物量隨孵育時間