氨萘非特載藥體系的研究.pdf

1、氨萘非特（Amonafide，Amo）是一個最早應用于臨床研究的萘酰亞胺類化合物，對晚期乳腺癌和白血病具有較好的療效。作為化療藥物，其對人骨髓具有一定的不良反應；在體內(nèi)易被 N-乙?；D(zhuǎn)移酶Ⅱ（NAT2）乙酰化生成 N-乙酰-Amo，該乙?；a(chǎn)物因個體差異在體內(nèi)代謝會產(chǎn)生不確定的毒副作用，使其目前停留于Ⅲ期臨床研究。我們設(shè)想構(gòu)建Amo載藥體系，即制備成可生物降解的緩釋納米粒，從而延緩Amo體內(nèi)代謝并克服與其代謝機制相關(guān)的毒副作用，此外，

2、減少服藥次數(shù)，為其臨床應用做有益的探索。
　　本文優(yōu)化了Amo的合成，構(gòu)建了以聚乳酸-乙醇酸（PLGA）為載體的Amo納米粒（nanoparticle，NP），研究了這些納米粒的制備、表征、體外釋藥特性及對多種腫瘤細胞的體外抑制作用。選用納米沉淀法制備Amo-PLGA NP，利用紫外分光光度法測定Amo-PLGA NP包封率和載藥量（裝載量），通過單因素及正交試驗優(yōu)化了Amo-PLGA NP的制備工藝；采用紅外、激光粒度儀和透鏡對

3、合成的納米粒形貌、結(jié)構(gòu)進行了表征；利用透析法模擬體內(nèi)環(huán)境研究了Amo-PLGA NP的體外釋放特性；利用噻唑藍比色法（MTT）、熒光顯微鏡、流式細胞術(shù)等考察Amo-PLGA NP對腫瘤細胞的抑制效應及其作用機制。
　　本文采用的Amo合成方法可獲得純度99.3％、產(chǎn)率76.3%的氨萘非特；紅外光譜研究表明，萘酰亞胺在1500-1700cm-1處的吸收峰明顯減弱，說明 Amo已成功地被包載于PLGA-NP中；透鏡下Amo-PLGA-

4、NP類似球形，平均粒徑大小為35.5 nm；紫外測試結(jié)果顯示制備的Amo-PLGA-NP納米粒平均裝載量為（1.945±0.031）%、平均包封率為（79.325±0.287）%；Amo納米粒在37℃、pH7.4的Tris-鹽酸緩沖液中，2h后的累積釋放率接近30%，為（29.32±0.89）%，說明Amo-PLGA NP存在一定的突釋現(xiàn)象，此后該納米粒具有明顯的緩釋特性，80h后釋藥率達（98.06±0.72）%；MTT結(jié)果顯示，與對

5、照組相比，空白納米粒（blank-NP）對乳腺癌細胞MCF-7、肝癌細胞A549及宮頸癌細胞HeLa三種腫瘤細胞，平均抑制率僅為（1.58±0.64）%，可以認為blank-NP本身對細胞抑制率無影響，對腫瘤細胞的抑制作用來源于Amo-PLGA-NP釋放的Amo；對MCF-7和A549細胞，Amo-PLGA-NP作用12h、24h和48h后，其抑制率明顯大于游離氨萘非特組（P<0.05）；對HeLa細胞，6h、12h、24h和48h后，

6、Amo-PLGA-NP組抑制率大于游離氨萘非特組（P<0.05）；而培養(yǎng)72h時，三種腫瘤細胞MTT實驗顯示 Amo-PLGA-NP組與游離氨萘非特組對腫瘤細胞增殖的抑制率無統(tǒng)計學差別（P>0.05）。倒置顯微鏡觀察顯示Amo和Amo-PLGA-NP分別作用三種細胞后，細胞變圓、貼壁能力減弱，胞質(zhì)固縮，觸角明顯大量消失，細胞發(fā)生空泡變、甚至有些死亡。熒光顯微鏡觀察到Amo-PLGA被三種癌細胞吞噬后，在藍色激發(fā)光下都有綠色熒光發(fā)出。流式