Akt1磷酸化PMS2(T156)及其對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響的研究.pdf

1、目的:
　　研究Akt1是否磷酸化PSM2（T156）及其對卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)功能影響。
　　方法:
　　1.構(gòu)建重組質(zhì)粒PMS2-T156A（PMS2156位點的蘇氨酸突變?yōu)楸彼幔?br>　　2.卵巢癌細(xì)胞分別轉(zhuǎn)染PMS2-T156A質(zhì)粒（突變組）和空載體（NC組），并設(shè)置未處理組作為空白對照（Control組）；
　　3. Akt1活化劑IGF-1處理卵巢癌細(xì)胞上調(diào)p-Akt水平；
　　4. West

2、ern Blot檢測卵巢癌細(xì)胞中p-Akt S473與p-PMS2 T156的表達(dá)水平；
　　5.劃痕實驗檢測卵巢癌細(xì)胞遷移能力；
　　6. Transwell侵襲實驗檢測卵巢癌細(xì)胞侵襲能力；
　　7.克隆形成實驗檢測卵巢癌細(xì)胞克隆形成能力；
　　8.流式細(xì)胞儀和Westen Blot檢測卵巢癌細(xì)胞凋亡及順鉑介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)果:
　　1. p-Akt S473和p-PMS2 T156在卵巢癌細(xì)

3、胞A2780和SKOV3中高表達(dá)，而在HO8910和ES2均低表達(dá)；轉(zhuǎn)染PMS2-T156A后，發(fā)現(xiàn)p-PMS2 T156表達(dá)顯著下降；用Akt1活化劑IGF-1使NC組和突變組中p-Akt S473上升后，發(fā)現(xiàn)在NC組中p-PMS2 T156表達(dá)水平明顯上升，而PMS2 T156A組中無明顯變化。
　　2.劃痕實驗結(jié)果顯示：在A2780和SKOV3細(xì)胞中，突變組劃痕間隙融合率分別為（39.00±6.25）％、（29.33±4.1

4、6）%，均明顯低于Control組（100.00±0.00）%、（100.00±0.00）%和NC組（96.00±5.29）%、（86.67±10.02）%，P<0.001。
　　3. Transwell侵襲實驗結(jié)果顯示：在A2780和SKOV3細(xì)胞中，突變組每視野穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（53.7±9.3）個、（72.7±7.1）個，均明顯低于Control組（163.0±14.4）個、（237.3±11.5）個和NC組（150.3±1

5、1.1）個、（218.0±15.5）個，P<0.001。
　　4.克隆形成實驗可見：在A2780和SKOV3細(xì)胞中，突變組細(xì)胞每100mm2克隆數(shù)（19.00±3.16）個、（4.75±2.50）個，均明顯低于Control組（76.00±6.06）個、（19.50±2.38）個和NC組（74.00±5.22）個、（17.25±3.40）個，P<0.001。
　　5.流式細(xì)胞儀分別檢測A2780和SKOV3中NC組、NC組+

6、順鉑、突變組、突變組+順鉑的凋亡情況，發(fā)現(xiàn)突變組凋亡明顯高于NC組；分別給予順鉑刺激后，發(fā)現(xiàn)突變組凋亡明顯高于NC組，而且NC組凋亡增加以晚期凋亡為主，而突變組早期、晚期凋亡均明顯增加；同樣的，Western Blot檢測凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)情況發(fā)現(xiàn)，突變組中Caspase3活化片段表達(dá)較NC組明顯增加；順鉑刺激后，突變組促凋亡蛋白P53和Caspase3活化片段表達(dá)較NC組明顯增加，而抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)較NC組明顯減少。