干預(yù)FANCF基因?qū)θ寺殉舶㎡VCAR3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響.pdf

1、前言：FANCF作為FA/BRCA通路的重要調(diào)控蛋白,參與正常細(xì)胞DNA修復(fù)、細(xì)胞周期與凋亡調(diào)控、解毒功能調(diào)節(jié)、生命信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等。如果FA/BRCA通路受損會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞染色體不穩(wěn)定以及對(duì)DNA損傷劑高度敏感。FA復(fù)合體的穩(wěn)定和FANCD2的泛素化激活是FA/BRCA通路的關(guān)鍵步驟,如果FANCF蛋白低表達(dá)或功能缺失,則會(huì)干擾FA/BRCA通路的正常功能,進(jìn)而參與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展。目前,已在多種實(shí)體腫瘤中證實(shí):FANCF蛋白低表達(dá)或功能缺失,

2、與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。而關(guān)于。FANCF是否參與卵巢癌發(fā)生、發(fā)展尚未見報(bào)道。
　　 本實(shí)驗(yàn)以FANCF基因?yàn)榘悬c(diǎn),研究FANCF基因沉默對(duì)卵巢癌OVCAR3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響,并檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的變化,探討FANCF基因是否參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展的調(diào)控,為卵巢癌發(fā)生、發(fā)展的研究提供新的思路。
　　 方法：應(yīng)用小提中量試劑盒提取質(zhì)粒,脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染到人卵巢癌OVCAR3細(xì)胞中,RT-PCR法及Western blot法檢測(cè)F

3、ANCF基因mRNA及蛋白表達(dá)水平,確認(rèn)OVCAR3-FANCF-RNAi細(xì)胞模型構(gòu)建成功;分別采用MTT法、流式細(xì)胞儀PI單染法及AnnexinV-FITC/PI雙染法檢測(cè)FANCF基因沉默前后細(xì)胞增殖、周期及凋亡等生物學(xué)特性的變化。
　　 結(jié)果：
　　 一、成功構(gòu)建OVCAR3-FANCF-RNAi細(xì)胞模型:與陰性對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染FANCF-shRNA質(zhì)粒后,FANCF基因mRNA及蛋白表達(dá)水平均明顯降低,轉(zhuǎn)染后24

4、h、48h及72h,FANCF mRNA表達(dá)抑制率分別為28.66％±5.91％、47.97％±10.91％、58.80％±11.10.80％(P＜0.05);蛋白表達(dá)抑制率分別為23.51±5.46％,33.24％±6.85％,38.65％±8.26％(P＜0.05),說明干預(yù)FANCF基因48h、72h時(shí)能顯著抑制mRNA及蛋白表達(dá),OVCRA3-FANCF-RNAi細(xì)胞模型成功建立。
　　 二、FANCF基因沉默對(duì)卵巢癌O

5、VCAR3細(xì)胞生物學(xué)特性的影響:
　　 1、FANCF基因沉默對(duì)人卵巢癌OVCAR3細(xì)胞增殖的影響:與陰性對(duì)照組相比,FANCF基因沉默后,細(xì)胞增殖明顯受到抑制。轉(zhuǎn)染后48h和72h,細(xì)胞增殖抑制率分別為28.92％±6.81％、40.72％±8.63％(P＜0.05)。
　　 2、FANCF基因沉默對(duì)人卵巢癌OVCAR3細(xì)胞周期的影響:與陰性對(duì)照組相比,FANCF基因沉默后,細(xì)胞S期比例明顯增加。轉(zhuǎn)染后48h和72h,

6、OVCAR3細(xì)胞S期比率分別為29.14％±6.26％、33.52％±7.72％(P＜0.05)。
　　 3、FANCF基因沉默對(duì)人卵巢癌OVCAR3細(xì)胞凋亡的影響:與陰性對(duì)照組相比,FANCF基因沉默后,細(xì)胞早期凋亡及晚期凋亡均明顯增加,轉(zhuǎn)染后48h和72h,OVCAR3細(xì)胞凋亡率分別為25.90％+4.12％、37.78％±9.16％(P＜0.05)。
　　 結(jié)論：FANCF基因沉默可抑制卵巢癌OVCAR3細(xì)胞增殖,