人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移細(xì)胞系的建立及生物學(xué)特性的研究.pdf

1、目的：篩選人卵巢癌定向淋巴道高轉(zhuǎn)移惡性腫瘤細(xì)胞亞群，并對(duì)其生物學(xué)特性進(jìn)行鑒定和轉(zhuǎn)移相關(guān)基因差異表達(dá)的研究。方法：將卵巢癌細(xì)胞株SKOV3細(xì)胞種植于裸鼠爪墊下，待植入物在裸鼠體內(nèi)成瘤并發(fā)生轉(zhuǎn)移時(shí)，取其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶癌細(xì)胞再次種植于裸鼠爪墊下傳代，每代均取出淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶瘤組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，通過單細(xì)胞分離(克隆)培養(yǎng)或局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶篩選的方法建立連續(xù)傳代細(xì)胞系，重復(fù)傳3代后，通過裸鼠接種實(shí)驗(yàn)觀察各代裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率。利用細(xì)胞生長(zhǎng)曲線測(cè)定、H

2、E染色、染色體分析、流式細(xì)胞儀、裸鼠接種、免疫組化等方法鑒定各代細(xì)胞的生物學(xué)特性?；蛐酒夹g(shù)研究各代轉(zhuǎn)移的細(xì)胞與原代細(xì)胞進(jìn)行與轉(zhuǎn)移相關(guān)基因的差異表達(dá)。結(jié)果：所建立的連續(xù)傳代細(xì)胞系，分別命名為SKOV3-PM1，SKOV3-PM2和SKOV3-PM3細(xì)胞，癌細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)傳3代后，裸鼠的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率為100％(10/10)，形成淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的數(shù)目較母系為多，母系轉(zhuǎn)移率10％(1/10)，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析P<0.05，有顯著差異。且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移途

3、徑較為單一；細(xì)胞染色體分析顯示原代SKOV3細(xì)胞染色體數(shù)目眾數(shù)為83～89條，SKOV3-PM3染色體眾數(shù)91～105條，并保持著卵巢上皮癌細(xì)胞生物學(xué)特性；SKOV3-PM3細(xì)胞倍增時(shí)間為22.7 h，原代SKOV3細(xì)胞為49.9 h，前者的生長(zhǎng)速度明顯快于后者。流式細(xì)胞分析顯示，SKOV3-PM細(xì)胞DNA合成期和分裂期細(xì)胞的比例高于母株SKOV3細(xì)胞。本研究在96個(gè)人類已知與腫瘤轉(zhuǎn)移有關(guān)基因的篩選中發(fā)現(xiàn)60個(gè)表達(dá)差異性基因，將SKOV