RASSF1A基因?qū)θ宋赴┘毎鸍NK磷酸化的影響.pdf

1、目的：
　　研究RASSF1A基因?qū)θ宋赴㎝GC-803細胞和SGC-7901細胞的JNK磷酸化水平的影響，初步探討RASSF1A對JNK信號通路的調(diào)控在胃癌發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)2種不同分化程度的人胃癌細胞（MGC-803細胞和SGC-7901細胞），采用穩(wěn)定轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染RASSF1A基因后，利用Western Blotting分別檢測轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因在人胃癌細胞中的表達，驗證穩(wěn)

2、定轉(zhuǎn)染效果；Western Blotting分別檢測轉(zhuǎn)染前后RASSF1A基因人胃癌細胞JNK磷酸化水平。
　　2.分別建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RASSF1A基因高表達組、未轉(zhuǎn)染組及空質(zhì)粒對照組人胃癌細胞裸鼠皮下成瘤模型，4-6w后提取瘤體組織，Western-blotting檢測JNK磷酸化水平。
　　結(jié)果：
　　1.人胃癌 MGC-803和SGC-7901細胞通過穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 RASSF1A基因后，通過Western Blotti

3、ng檢測發(fā)現(xiàn)，與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組RASSF1A基因蛋白呈高表達，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示RASSF1A基因被成功轉(zhuǎn)染至人胃癌MGC-803和SGC-7901細胞，穩(wěn)定高表達RASSF1A基因2.人胃癌 MGC-803細胞系和SGC-7901細胞系成功建立；Western Blotting結(jié)果顯示：人胃癌 MGC-803細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染前后，轉(zhuǎn)

4、染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及 pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組中P-JNK及JNK表達呈明顯下調(diào)趨勢（P<0.05），而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.通過裸鼠成瘤實驗，建立穩(wěn)定高表達、未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組和pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組的不同分化程度的胃癌細胞（MGC-803和S

5、GC-7901）裸鼠皮下成瘤模型，觀察皮下腫瘤生長，4-6w后提取瘤體組織，Western-blotting檢測JNK磷酸化水平，Western Blot實驗結(jié)果顯示，與未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組及pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-RASSF1A質(zhì)粒組（穩(wěn)定高表達）所形成的裸鼠瘤體組織中 P-JNK及 JNK表達呈下降趨勢（P<0.05），而未轉(zhuǎn)染質(zhì)粒組與pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>