去甲基化劑誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞RASSF1A基因表達(dá)及其對(duì)肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、目的:RASSFIA是位于3p21.3區(qū)域的新型抑癌基因，其啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化導(dǎo)致該基因在某些腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞中表達(dá)缺失。本研究用去甲基化劑5-氮雜-2’脫氧胞苷(5-Aza-CdR)處理肺腺癌細(xì)胞株A549，誘導(dǎo)高甲基化失活的抑癌基因RASSFIA重新表達(dá)并觀察其對(duì)肺腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。 方法:分別使用濃度為5×10<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol／L的5-Aza-CdR處理

2、肺腺癌細(xì)胞株A549，對(duì)照組細(xì)胞以PBS處理。通過(guò)RT-PCR檢測(cè)處理后抑癌基因RASSFIA mRNA表達(dá)的改變，MTT法觀察處理后細(xì)胞的生長(zhǎng)活性，并應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行細(xì)胞周期、凋亡率的分析。 結(jié)果: (1)肺腺癌細(xì)胞株A549經(jīng)不同濃度之5-Aza-CdR處理后，RASSFIA mRNA表達(dá)缺失的A549細(xì)胞檢出基因重新表達(dá)mRNA，5×10<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol

3、／L三個(gè)處理組RASSFlA mRNA表達(dá)相對(duì)量分別為(96.87±1.09)％、(89.90±2.88)％、(81.81±5.83)％，組間差異有顯著性，對(duì)照組A549細(xì)胞無(wú)RASSFlAmRNA表達(dá)； (2)由MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線，5-Aza-CdR處理后的A549細(xì)胞與對(duì)照組相比，生長(zhǎng)速度出現(xiàn)不同程度減慢； (3)5×i0<'-6>mol／L、5×10<'-6>mol／L、5×10<'-7>mol／L三個(gè)處理組

4、細(xì)胞G<'l>期比例分別為(42.5±1.1)％、(45.3±0.6)％、(43.3±0.7)％，對(duì)照組為(40.1±0.3)％，處理組與對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性；5×10<'-5>mol／L、5×10<'-5>mol／L、5×10<'-7>mol／L三個(gè)處理組細(xì)胞凋亡率分別為(19.5±2.1)％、(15.9±0.8)％、(12.3±1.5)％，處理組間差異有顯著性，對(duì)照組為(4.2±0.8)％，處理組與對(duì)照組比較差異有顯著性。

5、 (4)不同濃度5-Aza-CdR作用使A549 RASSFlA mRNA表達(dá)的量與凋亡率呈正顯著相關(guān)。 結(jié)論: (1)肺腺癌A549細(xì)胞存在著RASSFlA的表達(dá)缺失。 (2)5-Aza-CdR可實(shí)現(xiàn)啟動(dòng)子去甲基化誘導(dǎo)肺腺癌A549細(xì)胞重新表達(dá)RASSFlA，并在一定范圍內(nèi)呈濃度依賴(lài)性。 (3)5-Aza-CdR可抑制肺腺癌A549細(xì)胞的生長(zhǎng)、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，且與RASSFlA基因表達(dá)呈正相關(guān)，這提示RA