去甲基化劑對(duì)胰腺癌細(xì)胞BxPC-3中microRNAs表達(dá)的影響.pdf

1、目的:
　　采用LNATM microRNA芯片技術(shù)，探討去甲基化劑5-氮雜脫氧胞苷酸對(duì)胰腺癌BxPc-3細(xì)胞中microRNAs表達(dá)的影響，并獲得DNA甲基化修飾的microRNA表達(dá)譜。
　　方法:
　　將胰腺癌BxPc-3細(xì)胞的培養(yǎng)及分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組給予5-氮雜脫氧胞苷酸，處理72 hr，對(duì)照組給予同體積的PBS。再把裂解好的組織有機(jī)抽提，過(guò)濾分離RNA，然后用電泳檢查芯片RNA的完整性并用紫外分光光度測(cè)

2、定RNA濃度和純度。設(shè)定miRNA微陳列探針及熒光標(biāo)記miRNA(cy3/cy5)，經(jīng)過(guò)雜交和洗脫后，進(jìn)行microRNA芯片檢測(cè)，采集掃描圖像和處理數(shù)據(jù)。然后再用Trizol法提取總RNA，并用1％瓊脂糖電泳驗(yàn)證其完整性。最后根據(jù)芯片結(jié)果，選擇3個(gè)表達(dá)異常的miRNA進(jìn)行RT-PCR，進(jìn)一步驗(yàn)證miRNA的異常表達(dá)結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)果:
　　1、依芯片結(jié)果，以RATIO＞2倍為上調(diào)和RATIO＜0.5倍為下調(diào)的標(biāo)準(zhǔn)，獲

3、得miRNA差異表達(dá)譜。分析得出，共有63種miRNA上調(diào)和21種miRNA下調(diào)。其中上調(diào)明顯的有6種miRNA(miR-605、miR-720、miR-197-4、miR-34b、miR-148a和miR-205)，下調(diào)明顯的有3種miRNA(miR-569、miR-1207-5p和miR-1268)。
　　2、從表達(dá)明顯異常的9種miRNA中選擇3種（miR-34b、miR-148a和miR-205）進(jìn)行RT-PCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)3