microRNAs介導(dǎo)的去甲基化抑制胃癌細(xì)胞B7-H1的表達(dá).pdf

1、目的：探討microRNAs 介導(dǎo)的去甲基化抑制胃癌細(xì)胞B7-H1的表達(dá)。
　　 方法：流式檢測不同濃度5-Aza-Cd 處理5天和100u/ml的IFN-γ刺激24 小時AGS的B7-H1表達(dá)；microRNA芯片檢測B7-H1 陰性的5-Aza-Cd 處理5天和100u/ml的IFN-γ刺激24 小時的AGS和B7-H1 陽性的僅100u/ml的IFN-γ刺激24 小時的AGS 兩組microRNA表達(dá)譜差異，并結(jié)合micr

2、oRNA作用靶點(diǎn)預(yù)測軟件（TARGETSCAN）篩選出7個候選microRNAs,進(jìn)一步通過轉(zhuǎn)染microRNAs模擬體和雙熒光素酶報告載體篩選出靶向作用于B7-H1mRNA的microRNA;定量PCR檢測不同濃度5-Aza-Cd 處理5天AGS的microRNA表達(dá)和焦磷酸測序檢測microRNA 上游DNA的CpG島甲基化狀態(tài)，統(tǒng)計分析5-Aza-Cd 濃度、microRNA表達(dá)及microRNA 上游DNA的CpG 島甲基化水平

3、之間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：隨著5-Aza-Cd 濃度增加，AGS細(xì)胞B7-H1表達(dá)逐漸增加；篩選出的miR-152和miR-200b 靶向作用于B7-H1mRNA 抑制B7-H1基因表達(dá)；5-Aza-Cd可促進(jìn)miR-152和miR-200b的表達(dá)；5-Aza-Cd 導(dǎo)致miR-152基因上游DNA甲基化水平從15.46％降至0.23％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（p<0.05）;5-Aza-Cd 使miR-200b基因上游DNA甲基化水