胃癌中PTEN與B7-H1蛋白表達(dá)的相關(guān)性及機(jī)制研究.pdf

1、PTEN(也稱MMAC1或TEP1)基因是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的腫瘤抑制基因,它是至今發(fā)現(xiàn)的第一個(gè)具有雙特異性磷酸酶活性的抑癌基因,被視為p53后時(shí)代最重要的抑癌基因。其產(chǎn)物PTEN蛋白具有脂質(zhì)磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性,能夠使其底物PIP3去磷酸化,從而下調(diào)PI3K/AKT細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活性。實(shí)驗(yàn)證實(shí)PTEN也主要是通過(guò)作用于PIP3阻斷PI3K/AKT信號(hào)通路來(lái)發(fā)揮其抑癌作用的。目前,發(fā)現(xiàn)在多種惡性腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞株中有PTEN

2、基因的缺失或突變及蛋白表達(dá)異常。B7-H1又稱PD-L1,是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種新的共刺激分子,雖然B7-H1 mRNA廣泛表達(dá)在人體多種正常組織中,但B7-H1蛋白在正常組織中的表達(dá)僅限于巨噬細(xì)胞系統(tǒng)來(lái)源的細(xì)胞。近年來(lái),研究發(fā)現(xiàn)B7-H1也表達(dá)在多種腫瘤組織和多種腫瘤細(xì)胞株中,并在誘導(dǎo)特異性T細(xì)胞凋亡和腫瘤免疫逃逸過(guò)程中發(fā)揮重要作用。關(guān)于惡性腫瘤中調(diào)節(jié)B7-H1蛋白表達(dá)的機(jī)制,國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。不久前,國(guó)外有學(xué)者以神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞為研究對(duì)象,

3、發(fā)現(xiàn)PTEN的缺失導(dǎo)致神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面B7-H1蛋白分子表達(dá)增加并介導(dǎo)免疫抵抗,并提出其機(jī)制是通過(guò)PI3K/AKT下游的mTOR-S6K通路實(shí)現(xiàn)對(duì)B7-H1基因翻譯水平的調(diào)控,從而導(dǎo)致其蛋白表達(dá)增加。胃癌是世界上最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一,在我國(guó)胃癌的發(fā)病率和死亡率居各種惡性腫瘤的首位。目前尚未見(jiàn)有關(guān)胃癌組織中B7-H1蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)的研究報(bào)道。因此,本研究采用免疫組化和Western Blot技術(shù)檢測(cè)胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與

4、P-S6K的表達(dá)情況,探討胃癌組織中PTEN蛋白與B7-H1蛋白表達(dá)的相關(guān)性及其機(jī)制。
　　方法：1.免疫組化檢測(cè)胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白的原位表達(dá)采用二步法免疫組化檢測(cè)48例胃癌組織及11例癌旁正常組織中的PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K的表達(dá),分析PTEN與B7-H1蛋白在胃癌組織中的表達(dá)情況以及它們分別與胃癌患者臨床病理學(xué)指標(biāo)的關(guān)系,通過(guò)連續(xù)性切片各個(gè)指標(biāo)的染色分析在胃癌組織中PTEN、

5、B7-H1、S6K與P-S6K原位表達(dá)的相關(guān)性。2.Western Blot半定量胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白的表達(dá)采用Western Blot技術(shù)檢測(cè)胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K和P-S6K的表達(dá),用Fluorchem分析軟件半定量檢測(cè)結(jié)果,分析胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K蛋白表達(dá)水平的相關(guān)性。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,陽(yáng)性率之間的比較采

6、用x~2檢驗(yàn),兩變量之間的相關(guān)性分析采用計(jì)數(shù)資料的相關(guān)分析或者Spearman等級(jí)相關(guān)分析,以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：1.免疫組化結(jié)果1.1 PTEN原位表達(dá)結(jié)果胃癌組織中PTEN呈陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性信號(hào)主要位于細(xì)胞漿,少量位于細(xì)胞核內(nèi),陽(yáng)性表達(dá)率為43.75％(21/48),而癌旁正常胃黏膜中PTEN陽(yáng)性表達(dá)率為100％(11/11),二者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。PTEN在胃癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤

7、的大小無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05),與腫瘤的浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度、臨床分期有顯著相關(guān)性(P<0.05)。1.2 B7-H1原位表達(dá)結(jié)果胃癌組織中B7-H1呈陽(yáng)性表達(dá),陽(yáng)性信號(hào)主要位于細(xì)胞膜,少量位于細(xì)胞漿,陽(yáng)性表達(dá)率為62.50％(30/48),而癌旁正常胃黏膜中未見(jiàn)B7-H1分子的表達(dá),二者之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P<0.05。B7-H1在胃癌組織中的表達(dá)與患者的年齡、性別、腫瘤的大小、分化程度無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05),與

8、腫瘤的浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期有顯著相關(guān)性(P<0.05)。1.3胃癌組織中PTEN、B7-H1、S6K與P-S6K原位表達(dá)的相關(guān)性統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:PTEN蛋白與B7-H1蛋白的原位表達(dá)明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05),PTEN蛋白與P-S6K蛋白的原位表達(dá)明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05),B7-H1蛋白與P-S6K蛋白的原位表達(dá)明顯正相關(guān)(P<0.05),PTEN蛋白與S6K蛋白的原位表達(dá)無(wú)關(guān)聯(lián)(P=0.383),B7-H1蛋白與S6K

9、蛋白的原位表達(dá)無(wú)關(guān)聯(lián)(P=0.551)。2.Western Blot結(jié)果在胃癌組織中,PTEN蛋白與B7-H1蛋白表達(dá)水平顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05,r=-0.667),PTEN蛋白與P-S6K蛋白表達(dá)水平顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05,r=-0.610),B7-H1蛋白與P-S6K蛋白表達(dá)水平顯著正相關(guān)(P<0.05,r=0.724),PTEN蛋白與S6K蛋白表達(dá)水平不相關(guān)(P=0.601),B7-H1蛋白與S6K蛋白表達(dá)水平不相關(guān)(P=0.