胃癌中hMSH2與PTEN表達相關性研究.pdf

1、目的：胃癌是常見惡性腫瘤之一。在我國胃癌居各種惡性腫瘤的首位，胃癌年均死亡率為25.53/10萬人口，而且有逐漸增加的趨勢。大量實驗證實癌基因和抑癌基因編碼的蛋白大多參與細胞內傳導通路。癌基因的激活和抑癌基因的失活造成腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。對于胃癌有關癌基因、抑癌基因的改變進行研究，有助于加深理解胃癌生物學本質及探討胃癌發(fā)生，發(fā)展機制及指導臨床治療提供理論依據。 錯配修復基因(mismatch repair，MMR)是生物進化過程中

2、的保守基因，具有修復DNA堿基錯配，增強DNA復制忠實性，維持基因組穩(wěn)定性，降低自發(fā)性突變的功能。hMSH2是第一個被分離的人類MMR基因，于1993年由Fishel等克隆。研究表明hMSH2與胃癌的發(fā)生關系密切。PTEN(phosphataseand tensin homology deleted on chromosome ten,PTEN)為1997年發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，位于10q23.3，轉錄產物為515kb mRNA，是第一個被發(fā)

3、現(xiàn)的具有磷酸酶活性的抑癌基因。目前研究表明PTEN的腫瘤抑制作用，主要是依賴其磷酸酶的活性而實現(xiàn)的。Yang等研究表明：PTEN在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。有研究顯示hMSH2減少增加了癌基因和(或)抑癌基因的突變率，從而引起腫瘤發(fā)生。hMSH2是否通過增加PTEN的突變而引起腫瘤，hMSH2和PTEN之間有無相關性，有待于進一步研究。 本實驗檢測胃癌組織中hMSH2與PTEN的蛋白表達情況，結合對照近端癌旁組織(距癌組織3

4、cm)、遠端癌旁組織(距癌組織>10cm)及正常胃組織(為外傷、息肉、潰瘍病需手術切除的非胃癌組織以后稱正常組織)中二者的表達情況，探討hMSH2與PTEN在胃癌組織中的蛋白表達與臨床病理特征之間的關系，指導及尋求胃癌臨床診斷、評估其惡性程度及轉移潛能、預測其預后可能的有效方法。方法： 1.采用SP免疫組化兩步法對42例胃癌組織及其相應的近端癌旁組織、遠端癌旁組織及15例正常胃組織，進行hMSH2與PTEN蛋白表達的檢測；采用W

5、estern Blot半定量檢測42例胃癌組織及相應遠端癌旁組織hMSH2與PTEN蛋白表達。 2.采用SAS6.12統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學數(shù)據處理，計數(shù)資料用x2檢驗，P<0.05為差異有顯著性意義。應用非參數(shù)統(tǒng)計中Spearman等級相關對二者在胃癌組織中的表達相互間關系進行分析。 結果： 1.用免疫組織化學法檢測hMSH2與PTEN蛋白表達特征： 1.1hMSH2和PTEN蛋白在胃癌組織及近端癌旁組織、

6、遠端癌旁組織和正常胃組織中的表達： 胃癌組織中hMSH2、PTEN蛋白主要表達于細胞漿及細胞核。hMSH2蛋白表達缺失率在胃癌組織為54.76％(23/42)，在近端癌旁組織為19.05％(8/42)，在遠端癌旁組織為14.29％(6/42)，在正常胃組織為0.00％(0/15)。胃癌組織中hMSH2蛋白表達缺失率明顯高于近端癌旁組織、遠端癌旁組織及正常胃組織(P<0.05)；而近端癌旁組織、遠端癌旁組織及正常胃組織之間hMSH

7、2蛋白表達無顯著差異(P>0.05)。 PTEN蛋白表達缺失率在胃癌組織為61.90％(26/42)，在近端癌旁組織為23.81％(10/42)，在遠端癌旁組織為16.67％(7/42)，在正常胃組織為20.00％(3/15)。胃癌組織中PTEN蛋白表達缺失率明顯高于近端癌旁組織、遠端癌旁組織及正常胃組(P<0.05)；而近端癌旁組織、遠端癌旁組織及正常胃組織之間PTEN蛋白表達缺失率無顯著差異（P>0.05)； 1.2胃癌組織

8、中hMSH2和PTEN蛋白表達特征與臨床病理類型關系hMSH2表達缺失率與患者的年齡、性別、腫瘤發(fā)生的部位、腫瘤分化程度、漿膜侵犯、TNM分期、淋巴結轉移均無明顯關系(P>0.05)。 PTEN蛋白表達缺失率與患者年齡、性別、腫瘤發(fā)生部位未見明顯相關(P>0.05)、與腫瘤分化程度負相關(rs=-0.707317P<0.05)，與TNM分期、侵潤深度、淋巴結轉移呈正相關(rs=0.748157、rs=0.97958、rs=0.8

9、50255、rs=0.877482P<0.05)分化程度越高，PTEN表達缺失率越低，侵犯漿膜、TNM分期的Ⅲ+IV期、有淋巴結轉移，PTEN表達缺失率越高。 2.Western Blot檢測結果β-actin、hMSH2、PTEN蛋白分子量為42KD、110KD、55kD，Western雜交后分別在42KD、110KD、55kD位置出現(xiàn)相應陽性條帶。采用凝膠成像分析系統(tǒng)對雜交條帶進行半定量分析，蛋白含量以積分光密度值(IOD)

10、表示。每次檢測蛋白時均檢測β-actin蛋白，以其為標準對所檢測hMSH2、PTEN蛋白進行定量。與遠端對照組織相比，42例胃癌組織中hMSH2蛋白有21例出現(xiàn)低表達，其低表達率為50.00％，PTEN有17例出現(xiàn)低表達，其低表達率為40.48％。 3.hMSH2與PTEN蛋白表達的相關性hMSH2與PTEN蛋白表達在胃癌中呈正相關(免疫組化檢測中rs=0.938012，蛋白印記檢測中rs=0.870675P<0.05)。在胃癌組織中錯

11、配修復基因hMSH2蛋白表達缺失常伴有PTEN白表達下調。 結論： (1)免疫組化和western blot檢測結果一致，hMSH2與PTEN在胃癌的組織中表達缺失率升高，二者在胃癌組織中表達缺失率均高于近端癌旁組織、遠端癌旁組織及正常胃組織。(2)在胃癌組織中hMSH2表達與其臨床病理特征未見相關；(3)PTEN表達與其臨床病理特征相關：腫瘤分化程度高的胃癌組織中PTEN蛋白表達缺失率低；TNM分期Ⅲ+Ⅳ期、有淋巴結轉