B7-H1基因沉默對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用和對(duì)CIK細(xì)胞殺傷活性的影響.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我校或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名2受蜇日期：盤!：苧『占中國(guó)醫(yī)科

2、大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借闋。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文’論文

3、作者簽名：一指導(dǎo)教師簽名：盤2當(dāng)日中文論著摘要B7HI基因沉默對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用和對(duì)CIK細(xì)胞殺傷活性的影響目的了解腫瘤的免疫抑制機(jī)理、打破腫瘤免疫抑制是當(dāng)今腫瘤免疫治療的重要和前沿課題。B7H1／PD1是腫瘤細(xì)胞最主要的負(fù)性調(diào)節(jié)通路之一，B7H1作為共刺激分子B7家族成員在腫瘤細(xì)胞上表達(dá)，能夠通過受體(如PD1)誘導(dǎo)初始T細(xì)胞增殖，抑制已活化T細(xì)胞的增殖和分化，促使其凋亡；PD1在T細(xì)胞的活化后期表達(dá)。但是，此通路在腫瘤的發(fā)生

4、、發(fā)展的何時(shí)開始發(fā)揮作用，以及如何發(fā)揮作用，確切的機(jī)理仍然不清。CIK細(xì)胞是臨床上最為常用的免疫活性細(xì)胞，其中有沒有能夠避開B7H1／PD1抑制途徑的細(xì)胞亞群，或者通過怎樣的方法能夠解除這種抑制、增強(qiáng)CIK細(xì)胞的殺傷活性，仍然不明了，也未見相關(guān)的報(bào)道。方法采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)46例結(jié)腸癌、20例結(jié)腸腺瘤性息肉及28例結(jié)腸慢性炎癥患者組織中B7H1基因的表達(dá)，并與臨床資料比較，對(duì)其中46例結(jié)腸癌患者進(jìn)行電話隨訪；應(yīng)用細(xì)胞免疫化學(xué)染色

5、法檢測(cè)4株結(jié)腸癌細(xì)胞及1株人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞中B7H1蛋白水平的表達(dá)；針對(duì)B7H1設(shè)計(jì)合成RNA干擾片段，連接到pGenesil1U6載體上構(gòu)建shRNA真核表達(dá)載體；將上述重組載體轉(zhuǎn)入HCTI16細(xì)胞內(nèi)，應(yīng)用RTPCR、RealtimePCR及Westernblot方法檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞內(nèi)B7HlmRNA和蛋白水平的表達(dá)抑制率；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染前后腫瘤細(xì)胞周期的變化，同時(shí)對(duì)轉(zhuǎn)染前后的細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)7天，應(yīng)用MTT法繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線；選