芹菜素對人CIK細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞的影響及其機制研究.pdf

1、目的：探討芹菜素(Apigenin，Ap)對細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷(CIK)細(xì)胞殺傷結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞的影響及其機制。
　　方法：采集健康志愿者外周血20ml，用淋巴細(xì)胞分離液分離外周血單核細(xì)胞(PBMC)，在體外經(jīng)多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)培養(yǎng)CIK細(xì)胞；將不同濃度的芹菜素分別作用于CIK細(xì)胞和結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞24h、48h及72h后，用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測芹菜素對CIK細(xì)胞及結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞生長的影響；流式細(xì)胞術(shù)(

2、FCM)檢測不同濃度的芹菜素作用48h后CIK細(xì)胞顆粒酶B、穿孔素及CD107a的表達；乳酸脫氫酶(LDH)釋放法檢測不同濃度芹菜素作用CIK細(xì)胞48h后，CIK細(xì)胞對結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞的殺傷活性；Western-blot法檢測不同濃度芹菜素作用CIK細(xì)胞48h后SLP76在CIK細(xì)胞中的表達水平。
　　結(jié)果：MTT結(jié)果顯示，空白對照組和溶劑對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，與對照組比較，芹菜素濃度為1.17～4.7

3、μmol/L時在24h、48h及72h均能顯著促進CIK細(xì)胞的增殖(P<0.05)，超過37.5μmol/L時，CIK細(xì)胞的增殖受抑制，同一濃度下芹菜素作用三個時間段以48h段增殖作用更強。0.58～9.4μmol/L的芹菜素作用后，SW1116細(xì)胞的生長抑制率逐漸上升，但與對照組比較無顯著差異(P>0.05)，37.5～300μmol/L芹菜素在三個時間段對結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞生長均有明顯抑制作用(P<0.05)，且相同的時間段下，

4、芹菜素濃度越高，對結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞抑制作用越強。FCM分析顯示，2.35～9.4μmol/L芹菜素作用48h后，CIK細(xì)胞的顆粒酶B、穿孔素及CD107a的表達率顯著高于對照組(P<0.05)。LDH釋放法結(jié)果顯示濃度1.17～9.4μmol/L的芹菜素作用48h后，CIK細(xì)胞對結(jié)腸癌細(xì)胞SW1116的殺傷活性顯著高于對照組(P<0.05)，且呈先增強后下降趨勢，當(dāng)濃度為2.35μmol/L時殺傷活性達最高峰(63.5％)。Wes

5、tern blot結(jié)果顯示不同濃度芹菜素誘導(dǎo)CIK細(xì)胞48h后，SLP76的表達存在差異，0.58～9.4μmol/L芹菜素作用CIK細(xì)胞后SLP76蛋白的表達顯著高于對照組(P<0.05)，灰度值分析結(jié)果顯示，濃度2.35μmol/L組灰度值最高，37.5μmol/L濃度組灰度值最低。
　　結(jié)論：適當(dāng)濃度的芹菜素能夠有效促進CIK細(xì)胞的增殖；較高濃度的芹菜素對結(jié)腸癌SW1116細(xì)胞有明顯的抑制作用；適當(dāng)濃度的芹菜素能夠增強CIK