5-Aza-CdR對人胰腺癌細(xì)胞系MiaPaca2生長及RUNX3基因甲基化的影響.pdf

1、目的：研究去甲基化藥物5-氮雜-2’-脫氧胞苷(5-aza-2’-deoxycytidine，5-Aza-CdR)對人胰腺癌細(xì)胞系MiaPaca2的生長及Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子3(runt-relatedtranscriptionfactor3，RUNX3)基因甲基化和表達(dá)的影響，探討RUNX3基因在胰腺癌細(xì)胞中失活的主要機(jī)制，進(jìn)一步探索通過改變胰腺癌細(xì)胞RUNX3基因甲基化來治療胰腺癌的新思路。
　　方法：(1)體外傳代培養(yǎng)Mia

2、Paca2胰腺癌細(xì)胞，經(jīng)不同濃度5-Aza-CdR(2.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)處理24h～96h后，倒置顯微鏡下觀察MiaPaca2細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化；MTT法檢測5-Aza-CdR對MiaPaca2細(xì)胞生長增殖的影響。(2)收集未經(jīng)藥物處理和經(jīng)10μmol/L5-Aza-CdR處理72h的MiaPaca2細(xì)胞，提取兩組細(xì)胞基因組DNA，甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)(MSP)檢測RUNX3基因甲基化

3、的變化情況。(3)收集未經(jīng)藥物處理和經(jīng)5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR處理72h的MiaPaca2細(xì)胞，提取各組細(xì)胞總RNA，采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)半定量檢測RUNX3mRNA表達(dá)的變化。
　　結(jié)果：(1)經(jīng)5-Aza-CdR處理后，MiaPaca2細(xì)胞的生長受到抑制，且隨著藥物濃度的增加及作用時(shí)間的延長其抑制作用越明顯。(2)未經(jīng)藥物處理的MiaPaca2細(xì)胞RUNX3基因呈完全甲基化狀態(tài)，而經(jīng)

4、10μmol/L5-Aza-CdR處理72h后，RUNX3基因表現(xiàn)為不完全甲基化狀態(tài)，該基因甲基化得到部分逆轉(zhuǎn)。(3)未經(jīng)藥物處理的MiaPaca2細(xì)胞未能檢測到RUNX3基因mRNA表達(dá)，而經(jīng)5μmol/L及10μmol/L5-Aza-CdR處理72h后，RUNX3mRNA可恢復(fù)表達(dá)，且表達(dá)水平與用藥劑量存在一定量效關(guān)系。
　　結(jié)論：RUNX3基因甲基化狀態(tài)與胰腺癌的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，異常甲基化可能是引起RUNX3基因表達(dá)缺失