RASSF1A基因對人胃癌SGC-7901細胞miRNA表達譜的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：建立穩(wěn)定高表達RASSF1A人胃癌SGC-7901細胞株；探討RASSF1A基因對人胃癌SGC-7901細胞miRNA表達譜的影響。
　　方法：利用脂質體轉染技術將真核表達重組體pcDNA3.1-RASSF1A質粒和空載體pcDNA3.1質粒分別導入SGC-7901細胞，經G418篩選后獲得穩(wěn)定轉染細胞克隆，RT-PCR、Western blotting檢測RASSF1A基因表達;采用丹麥Exiqon公司miRNA芯片分析高

2、表達RASSF1A基因的pcDNA3.1-RASSF1A-SGC-7901細胞株與空質粒對照組pcDNA3.1-SGC-7901細胞株之間的miRNA差異表達情況，采用GenePix pro V6.0和Axon GenePix4000B分析有統(tǒng)計學意義的差異表達位點，挑選差異表達的miRNA中的三個miRNA(miR-181a、miR-181b、miR-711)并進行miRNA qRT-PCR分析,進一步驗證miRNA芯片結果。

3、　　結果：通過脂質體轉染技術成功建立穩(wěn)定高表達 RASSF1A基因人胃癌SGC-7901細胞株；運用miRNA芯片篩選轉染RASSF1A基因前后人胃癌SGC-7901細胞，篩選出14條差異表達的miRNA，其中上調的7條，分別為：miRPlus-E1153、miRPlus-E1225、miRPlus-E1133、miR-377、miRPlus-E1077、miR-711、miR-1207-3p；下調的7條，分別為：miR-330-5p、

4、miR-181a、miR-181b、miR-483-5p、miRPlus-F1086、miR-132、miRPlus-E1026；經miRNA qRT-PCR驗證miR-181a、miR-181b、miR-711的表達與miRNA芯片結果一致。
　　結論：1．高表達RASSF1A抑癌基因能導致SGC-7901細胞microRNA表達譜發(fā)生改變；
　　2．miR-181a、miR-181b、miR-711的表達異?？赡芘c胃癌的

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