氧化苦參堿對人胃癌SGC-7901細(xì)胞HGC-1表達(dá)的影響及調(diào)控機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　觀察中藥苦參提取物氧化苦參堿(Oxymatrine，OM)對人胃癌SGC-7901細(xì)胞人粒細(xì)胞集落刺激因子-1（HGC-1）表達(dá)的影響，并研究 OM是否通過 NF-κB信號通路調(diào)控體外培養(yǎng)的人胃癌 SGC-7901細(xì)胞 HGC-1表達(dá)。探討氧化苦參堿抗腫瘤的作用機(jī)制，為應(yīng)用于臨床腫瘤的治療提供部分理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　用培養(yǎng)的人胃癌SGC-7901細(xì)胞與氧化苦參堿共孵育培養(yǎng)48h，采用逆轉(zhuǎn)錄PCR（R

2、T-PCR）檢測氧化苦參堿對SGC-7901細(xì)胞 HGC-1基因轉(zhuǎn)錄的影響；Western blot檢測氧化苦參堿對SGC-7901細(xì)胞HGC-1蛋白表達(dá)的影響；并裂解SGC-7901細(xì)胞提取核蛋白檢測p65的核轉(zhuǎn)位情況；此外，為探討NF-κB與HGC-1基因表達(dá)的關(guān)系，在SGC-7901細(xì)胞與氧化苦參堿共培養(yǎng)時，加入25μM NF-κB特異性抑制劑二硫代氨基甲酸吡咯烷（pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC）

3、共孵育后，并行RT-PCR檢測其對HGC-1基因轉(zhuǎn)錄的影響。
　　結(jié)果：
　?。?）SGC-7901細(xì)胞與氧化苦參堿共孵育后，RT-PCR結(jié)果顯示，HGC-1基因mRNA水平明顯降低（p＜0.05），而對照組表達(dá)水平無明顯變化（p＞0.05）。
　　（2）SGC-7901細(xì)胞與氧化苦參堿共孵育后，Western blot結(jié)果顯示，HGC-1表達(dá)明顯減弱（p＜0.05），而對照組表達(dá)水平無明顯變化（p＞0.05）。

4、>　?。?）SGC-7901細(xì)胞與氧化苦參堿共孵育后即可檢測出 p65蛋白轉(zhuǎn)移至核內(nèi)減少，表明氧化苦參堿與SGC-7901細(xì)胞共孵育后能抑制NF-κB活性。NF-κB特異性抑制劑PDTC能進(jìn)一步促進(jìn)氧化苦參堿下調(diào)HGC-1基因表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）氧化苦參堿能下調(diào)SGC-7901細(xì)胞HGC-1的表達(dá)，且作用隨著氧化苦參堿濃度的增加而增強(qiáng)。
　?。?）氧化苦參堿通過抑制NF-κB活性，下調(diào) HGC-1基因的表達(dá)，