殼寡糖對團頭魴頭腎巨噬細胞免疫功能的影響.pdf

1、殼寡糖是殼聚糖的降解產(chǎn)物，其水溶性好，易吸收，能抗菌、抗腫瘤、提高機體免疫力。殼寡糖激活如巨噬細胞、脾臟T淋巴細胞等免疫細胞，活化的免疫細胞不僅產(chǎn)生活性氧、活性氮等活性物質(zhì)，還能分泌細胞因子。相關(guān)研究表明，投喂殼寡糖可以增強魚類的免疫應(yīng)答及抗感染能力，但其具體的作用機制尚不清楚。因此，本研究通過體內(nèi)和體外兩種實驗方法，以殼寡糖作為免疫刺激劑探究其對團頭魴頭腎巨噬細胞免疫功能的影響。主要的研究結(jié)果如下:
　　1、通過團頭魴頭腎巨噬細

2、胞的分離、純化、鑒定，獲得了純度超過98％的團頭魴頭腎巨噬細胞。
　　2、殼寡糖刺激巨噬細胞，吞噬含有GFP的大腸桿菌，通過熒光顯微鏡觀察和酶標(biāo)儀檢測殼寡糖組比對照組吞噬細菌數(shù)顯著增強，產(chǎn)生活性氧、活性氮、iNOS酶活顯著增強。一氧化氮合酶的mRNA及NADPH氧化酶五個亞基(p91phox、p22phox、p40phox、p47phox、p67phox) mRNA水平與對照組相比顯著提高。
　　3、投喂1％殼寡糖一周，投喂

3、組分離的巨噬細胞產(chǎn)生活性氧、活性氮及IL-1βmRNA、TNF-α mRNA水平與對照組相比顯著性增強。
　　4、克隆團頭魴一氧化氮合酶(iNOS)基因的全長序列(Genbank accession NO:KJ668755)全長4215bp，5'UTR為197bp，3'UTR為775 bp，開放閱讀框(ORF)為3243 bp，編碼1080aa。3'末端具有典型的加尾信號AATAAA和PolyA尾巴。TMpred軟件分析顯示iNO

4、S具有3個分別由28、25、21個氨基酸組成的跨膜區(qū)，氨基酸結(jié)構(gòu)預(yù)測顯示iNOS不存在信號肽序列，包含4個主要的結(jié)構(gòu)域，即NOsynthase結(jié)構(gòu)域（位置在80-451）;flavodoxin1結(jié)構(gòu)域(490-621);FAD結(jié)合域(670-897); NAD結(jié)合域(929-1043)。還包括十分保守的血紅素、鈣調(diào)蛋白、四氫生物蝶呤、FAD、FMN、和NADH等輔因子的結(jié)合位點。
　　結(jié)果表明:殼寡糖能夠提高巨噬細胞對細菌的吞噬能