殼聚糖對團(tuán)頭魴吞噬細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)及其作用機(jī)理研究.pdf

1、本研究在對團(tuán)頭魴頭腎結(jié)構(gòu)的觀察，頭腎吞噬細(xì)胞的分離、形態(tài)學(xué)及功能鑒定的基礎(chǔ)上，主要研究了三種不同分子量不同水溶性殼聚糖對吞噬細(xì)胞吞噬功能及呼吸爆發(fā)功能的影響，同時通過添加不同配體直接作用于細(xì)胞上初步探討了三種殼聚糖與分離純化吞噬細(xì)胞的結(jié)合能力及其對吞噬細(xì)胞功能影響的作用機(jī)理。主要為繼續(xù)深入研究殼聚糖對團(tuán)頭魴吞噬細(xì)胞功能調(diào)節(jié)的作用機(jī)理打下基礎(chǔ)。主要結(jié)果如下:
　　 (1)對團(tuán)頭魴頭腎的解剖結(jié)構(gòu)，顯微結(jié)構(gòu)，超顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行了分析。結(jié)果

2、顯示，團(tuán)頭魴頭腎位于胸腔內(nèi)咽退縮肌上方兩側(cè)，分左右兩葉，組織切片觀察頭腎完全屬于網(wǎng)狀淋巴組織，分為淋巴細(xì)胞聚集區(qū)和粒細(xì)胞聚集區(qū)并且兩聚集區(qū)是連續(xù)的。印跡片及超薄切片均可以鑒定頭腎中的免疫細(xì)胞。其中粒細(xì)胞中含有其他細(xì)胞缺少的特殊顆粒，巨噬細(xì)胞有偽足，胞質(zhì)內(nèi)有溶酶體，淋巴細(xì)胞含有較大的核。
　　 (2)對團(tuán)頭魴頭腎吞噬細(xì)胞的顯微、超顯微結(jié)構(gòu)觀察及其貼壁純化培養(yǎng)的顯微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察與分析，結(jié)果顯示巨噬細(xì)胞表面形成粗大的偽足，胞質(zhì)含有大量

3、溶酶體、空泡以及線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。溶酶體電子密度不一，大小不等。粒細(xì)胞內(nèi)含有大量大小不等的特殊顆粒。特殊顆粒為具有棒針狀電子致密核心的圓形或橢圓形的顆?；?yàn)榫哂袌A形電子致密核心的圓形或橢圓形顆粒，淋巴細(xì)胞細(xì)胞核幾乎占據(jù)整個細(xì)胞。分離吞噬細(xì)胞培養(yǎng)3h時，淋巴細(xì)胞和未貼壁的吞噬細(xì)胞含量很少，貼壁吞噬細(xì)胞多呈圓形。平鋪在培養(yǎng)皿底部，呈煎雞蛋狀，細(xì)胞核偏向細(xì)胞一側(cè)。培養(yǎng)18 h后Hanks液洗去未貼壁及死細(xì)胞后貼壁吞噬細(xì)胞鋪展或伸長呈各種形狀在培

4、養(yǎng)皿底部，并且發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有扎堆生長的特性。一般5-6個生長在一起。
　　 (3)對分離吞噬細(xì)胞的吞噬功能與呼吸爆發(fā)功能的檢測與分析，結(jié)果顯示，剛分離的和培養(yǎng)3h的細(xì)胞都具有較強(qiáng)的吞噬福爾馬林滅活的金黃色葡萄球菌的能力，其中剛分離的吞噬細(xì)胞的吞噬百分比為25.50％±0.58％，吞噬指數(shù)為90.80±0.84。電鏡下可觀察到兩種細(xì)胞具有吞噬能力，分別為巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞，巨噬細(xì)胞中有大小不等的吞噬泡，有些吞噬泡內(nèi)的細(xì)菌已開始變

5、形降解。在吞噬泡周圍有較多溶酶體靠近，還可觀察到溶酶體融合進(jìn)入吞噬泡。中性粒細(xì)胞中同樣也還有大小不等的吞噬泡。在對團(tuán)頭魴頭腎吞噬細(xì)胞呼吸爆發(fā)活性的研究中，發(fā)現(xiàn)空白對照組中，發(fā)熒光的細(xì)胞比例只有4.64％，熒光強(qiáng)度為111.07。而在實(shí)驗(yàn)組中佛波豆蔻酸乙酯(PMA)刺激后發(fā)熒光的細(xì)胞比例為79.88％，熒光強(qiáng)度為459.42。無論在發(fā)熒光細(xì)胞比例還是細(xì)胞的總體熒光強(qiáng)度都呈極顯著性差異(P＜0.01)。
　　 (4)對三種不同殼聚糖

6、對分離吞噬細(xì)胞吞噬功能及呼吸爆發(fā)功能影響的檢測與分析。結(jié)果顯示，三種殼聚糖組(100μg/mL)均能顯著提高吞噬細(xì)胞的吞噬活性(P＜0.01)，添加殼聚糖組，吞噬細(xì)胞吞噬能力顯著增加，細(xì)胞內(nèi)吞噬大量的金黃色葡萄球菌，并且細(xì)胞發(fā)生變形，而對照組吞噬的金黃色葡萄球菌相對較少。三種殼聚糖組間無差異(P＞0.05)。三種殼聚糖組在發(fā)熒光細(xì)胞百分比及細(xì)胞發(fā)熒光強(qiáng)度上均極顯著高于對照組(P＜0.01)。其中水溶性殼聚糖組的發(fā)熒光細(xì)胞百分比顯著高于其