阿司匹林和氟伐他汀通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1途徑抑制人臍動(dòng)脈平滑肌增殖作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、炎癥在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中具有重要作用，貫穿于粥樣硬化病變的各個(gè)階段，眾多因素，包括細(xì)胞因子等參與其中。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(Transforminggrowthfactor-β，TGF-β)及其信號(hào)途徑是由眾多信號(hào)途徑所編織的網(wǎng)絡(luò)中的重要結(jié)點(diǎn)之一，在炎癥性疾病中起著重要作用，同時(shí)與粥樣硬化密切相關(guān)，但機(jī)制較復(fù)雜，有研究表明TGF-β對(duì)粥樣硬化相關(guān)疾病的結(jié)果有預(yù)示作用，且可能與某些藥物的保護(hù)性作用可能有關(guān)。目前阿司匹林和他汀類藥物

2、是臨床治療粥樣硬化相關(guān)性疾病的常規(guī)藥物，近來(lái)的研究認(rèn)為二者在調(diào)節(jié)炎癥免疫反應(yīng)方面可能具有更多新的作用機(jī)制和途徑，且可能通過(guò)某些相同或相似途徑發(fā)揮協(xié)同作用，有待于進(jìn)一步研究。 目的：探討阿司匹林與氟伐他汀對(duì)VSMCs增殖及細(xì)胞周期的影響以及TGFβ1信號(hào)途徑在其中可能發(fā)揮的作用；觀察阿司匹林與氟伐他汀對(duì)HUASMCs表達(dá)TGF-β1mRNA的水平的影響；探討TGF-β1與動(dòng)脈粥樣硬化病變以及斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系。 方法：本

3、實(shí)驗(yàn)利用人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HUASMCs)進(jìn)行體外培養(yǎng)，通過(guò)MTT法和流式細(xì)胞儀觀察不同劑量阿司匹林與氟伐他汀以及加入TGF-β1中和抗體后對(duì)細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響；通過(guò)RT-PCR方法觀察阿司匹林與氟伐他汀對(duì)HUASMCs表達(dá)TGF-β1mRNA的水平的影響；用免疫組織化學(xué)方法研究人各期動(dòng)脈粥樣硬化標(biāo)本中TGF-β1的表達(dá)分布情況以探討TGF-β1與動(dòng)脈粥樣硬化病變以及斑塊穩(wěn)定性之間的關(guān)系。 結(jié)果：不同濃度阿司匹林(0.5

4、mmol/L，1.0mmol/L，2.0mmol/L，5.0mmol/L)和氟伐他汀(0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L)呈劑量依賴性地抑制HUASMCs的增殖(P＜0.01)，這種抑制作用不依賴于細(xì)胞毒性，且可被TGF-β1中和抗體所逆轉(zhuǎn)(P＜0.05)。阿司匹林(2.0mmol/L)及氟伐他汀(1.0μmol/L)可使HUASMCs的增殖阻滯在G0/G1期(P＜0.05)，TGF-β1中和抗體可使阿司匹林(2.

5、0mmol/L)作用下的細(xì)胞周期G0/G1期減少，S期增多(P＜0.05)，但對(duì)于氟伐他汀(1.0μmol/L)的作用無(wú)明顯影響。阿司匹林(1.0mmol/L，2.0mmol/L，5.0mmol/L)和氟伐他汀(0.1μmol/L、1.0μmol/L、10μmol/L)使體外培養(yǎng)HUASMCs中TGF-β1mRNART-PCR產(chǎn)物水平升高(P＜0.05)，且聯(lián)合作用下，與單獨(dú)加入阿司匹林或氟伐他汀相比TGF-β1mRNART-PCR產(chǎn)物

6、水平有所增加(P＜0.05)。通過(guò)免疫組化方法對(duì)粥樣硬化病變進(jìn)行分析觀察到血管內(nèi)膜TGF-β1表達(dá)水平在不同病變分期有所不同(P＜0.05)，在正常血管內(nèi)膜TGF-β1呈低表達(dá)或不表達(dá)，在病變血管內(nèi)膜表達(dá)增加且早期水平高于晚期(P＜0.05)，且在穩(wěn)定斑塊中表達(dá)較強(qiáng)(P＜0.05)。 結(jié)論；1.TGF-β1參與動(dòng)脈粥樣硬化病變的過(guò)程，且以保護(hù)性作用為主。 2.阿司匹林和氟伐他汀可呈時(shí)間和劑量依賴性方式抑制體外培養(yǎng)HUAS