氟伐他汀對(duì)溶血磷脂酰膽堿誘導(dǎo)動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖與凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察氟伐他汀對(duì)溶血磷脂酰膽堿(LPC)誘導(dǎo)人臍動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(HUASMC)增殖及凋亡相關(guān)基因的影響并探討其機(jī)制，為他汀類藥物的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：原代培養(yǎng)人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞待細(xì)胞生長(zhǎng)融合后，用無(wú)血清DMEM培養(yǎng)液培養(yǎng)24h，使細(xì)胞同步化后分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。隨機(jī)分成正常對(duì)照組、LPC組、氟伐他汀預(yù)孵育組，氟伐他汀預(yù)孵育組按濃度不同又分為10-5mol·L-1、10-6mol·L-1、10-7mol·L-1，相同濃

2、度(10-6mol·L-1)氟伐他汀按時(shí)間不同又分為6h、12h、24h、48h、72h。用細(xì)胞計(jì)數(shù)和MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞增殖及細(xì)胞活力；比色法檢測(cè)細(xì)胞和細(xì)胞培養(yǎng)液中NO的含量；Hoechst-33258染色法觀察細(xì)胞凋亡情況；流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期分布；免疫組織化學(xué)染色方法和RT-PCR測(cè)定血管平滑肌凋亡相關(guān)因子Survivin、Fas的表達(dá)。 結(jié)果： (1)溶血磷脂酰膽堿促進(jìn)細(xì)胞增殖，使細(xì)胞數(shù)量和增殖指數(shù)增

3、大，氟伐他汀能抑制5mg·L-1，溶血磷脂酰膽堿(LPC)對(duì)血管平滑肌細(xì)胞的增殖作用，使細(xì)胞NO釋放量增加，細(xì)胞數(shù)量和增殖指數(shù)減少； (2)流式細(xì)胞儀觀察LPC組血管平滑肌細(xì)胞處于DNA合成期和分裂期，S期的百分?jǐn)?shù)高于對(duì)照組，氟伐他汀預(yù)孵育后使血管平滑肌細(xì)胞周期中的G0/G1期細(xì)胞比例增多，S期細(xì)胞比例減少，細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組升高。 (3)Hoechst-33258染色法發(fā)現(xiàn)：氟伐他汀誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生凋亡，隨著作用

4、時(shí)間延長(zhǎng)和濃度增大細(xì)胞凋亡發(fā)生率增加，可見(jiàn)大量血管平滑肌細(xì)胞發(fā)生核碎裂和核邊聚現(xiàn)象。 (4)LPC增加Survivin的表達(dá)，細(xì)胞內(nèi)可見(jiàn)大量棕黃色顆粒，氟伐他汀預(yù)孵育組6h時(shí)Survivin.表達(dá)開(kāi)始下降，24h下降最明顯；Fas基因早期表達(dá)不明顯，到48h、72h后明顯表達(dá)。 結(jié)論：氟伐他汀抑制LPC促HUASMC增殖作用，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)生凋亡，血管平滑肌細(xì)胞凋亡率升高，其促凋亡作用主要與上調(diào)FasmRNA表達(dá)，下調(diào)Sur