高良姜素通過阻斷轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF--β)抑制人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤增殖、侵襲和遷移能力.pdf

1、目的：
　　探討高良姜素對人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U87和U251細(xì)胞系增殖、侵襲和遷移能力的影響，及其抗癌作用的相關(guān)機制，為高良姜素臨床治療人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤提供體外實驗理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　(1)體外常規(guī)培養(yǎng)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、U251;(2)用CCK-8法檢測不同濃度高良姜素（10、20μmol/L）作用人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、U251細(xì)胞24小時后細(xì)胞存活率的變化;(3)采用劃痕實驗、Transwell實驗檢測不同

2、濃度高良姜素(10、20μmol/L)作用24h后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、U251細(xì)胞遷移、侵襲能力的變化;(4)采用Western blotting方法檢測不同濃度高良姜素（10、20μmol/L）處理后人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、U251中轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的表達(dá)情況。(5)使用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達(dá)TGF-β，觀察高良姜素對過表達(dá)TGF-β的細(xì)胞系遷移、侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　(1)CCK-8實驗結(jié)果示：以0μ

3、mol/L高良姜素組為參照，10、20μmol/L高良姜素組的細(xì)胞存活率減低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與0、10μmol/L高良姜素組比較，20μmol/L高良姜素細(xì)胞存活率明顯下降，分別是63.37％、64.87％，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。提示高良姜素抑制人膠質(zhì)瘤U87、U251細(xì)胞系的增殖，且抑制程度與藥物濃度呈相關(guān)性。
　　(2)劃痕實驗結(jié)果示：以0μmol/L高良姜素組為參照，10、20μmol/L高良

4、姜素組的細(xì)胞遷移能力減低，U87細(xì)胞的傷口愈合百分比分別為(47.91±2.14)％、(40.50±1.24)％、（7.36±1.45）％，U251細(xì)胞的傷口愈合百分比分別為(48.28±2.74)％，(40.77±2.23)％，(9.54±1.18)％。差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。且20μmol/L高良姜素的細(xì)胞遷移能力低于10umol/L組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)?？梢?，高姜良素可抑制U87、U251細(xì)胞的遷移，

5、抑制作用呈濃度依賴性，濃度越高，抑制作用越強。
　　(3)Transwell實驗結(jié)果示：與0μmol/L高良姜素組相比，10、20umol/L高良姜素組U87侵襲到達(dá)下室的細(xì)胞數(shù)目減少（66.67±21.17，216.67±20.55，61.67±6.43），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。各組U251侵襲到達(dá)下室的細(xì)胞數(shù)目也同樣減少（449.33±24.17，292±8.19，129.33±15.01），差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、＜0.001)?？梢姴煌瑵舛鹊母呓妓乜梢砸种芔87、U251細(xì)胞的侵襲能力。與10umol/L高良姜素組相比，20umol/L高良姜素組侵襲到達(dá)下室的細(xì)胞數(shù)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，可見高良姜素對U87、U251細(xì)胞侵襲能力的抑制作用呈濃度依賴性，濃度越高，抑制作用越強。
　　(4)Western blotting實驗結(jié)果示：0、10、20μmol/L高姜良素作用U87、U251細(xì)胞TGFβ蛋白表達(dá)量逐漸下降（

7、U87細(xì)胞TGF-β灰度值分別為：1.00±0.00、0.42±0.04、0.24±0.04;U251細(xì)胞TGF-β灰度值分別為1.00±0.00、0.52±0.04、0.30±0.04），濃度為20μmol/L高良姜素的U87、U251細(xì)胞TGF-β蛋白表達(dá)最低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，可見高良姜素可以抑制TGF-β的表達(dá)，濃度越高抑制作用越強。
　　(5)采用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達(dá)TGF-β，①Western blottin

8、g結(jié)果顯示0μmol/L高良姜素組、20μmol/L高良姜素組、TGF-β過表達(dá)組、TGF-β過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組U87細(xì)胞TFG-β相對表達(dá)量依次為1.00±0.00、0.43±0.08、1.63±0.21、0.78±0.05;U251細(xì)胞TFG-β相對表達(dá)量依次為1.00±0.00、0.29±0.04、1.98±0.20、0.86±0.06。與對照組相比，TGF-β過表達(dá)組TFGβ的表達(dá)量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P

9、＜0.05)，提示質(zhì)粒轉(zhuǎn)染過表達(dá)TGF-β實驗成功。與TGF-β過表達(dá)組相比、TGF-β過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組TGF-β的表達(dá)也明顯降低，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示高良姜素可以抑制TGF-β的表達(dá)。②傷口愈合實驗檢測結(jié)果：0μmol/L高良姜素組、20μmol/L高良姜素組、TGF-β過表達(dá)組、TGF-β過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組U87細(xì)胞傷口愈合百分比依次為(45.46±3.01)％、(6.97±1

10、.92)％、(61.01±4.62)％、(29.94±4.73)％。U251細(xì)胞分別為(51.11±5.97)％、(9.14±2.19)％、(65.57±7.31)％、(36.50±4.48)％。與0umol/L高良姜素組相比，TGFβ過表達(dá)組傷口愈合百分比明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，提示TGF-β過表達(dá)可以增加U87、U251細(xì)胞的遷移能力。而與TGF-β過表達(dá)組相比，TGFβ過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組U87

11、細(xì)胞的傷口愈合百分比降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示高良姜素可能通過阻斷TGF-β來抑制U87、U251細(xì)胞的遷移作用。③Transwell實驗結(jié)果顯示：0μmol/L高良姜素組、20μmol/L高良姜素組、TGF-β過表達(dá)組、TGF-β過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組U87細(xì)胞侵襲到達(dá)下室的數(shù)目依次為380.67±35.73、61.67±6.43、452.00±31.00、145.00±19.08。U251細(xì)胞各組侵襲到

12、達(dá)下室的數(shù)目分別為460.67±41.19、108.00±21.66、579.00±27.87、207.33±22.18。與0umol/L高良姜素組相比，TGF-β過表達(dá)組細(xì)胞侵襲數(shù)量明顯增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)，提示TGF-β過表達(dá)可以增加U87、U251細(xì)胞的侵襲能力。而與TGF-β過表達(dá)組相比，TGF-β過表達(dá)+20μmol/L高良姜素組U87、U251細(xì)胞的侵襲能力降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，提示高良