轉(zhuǎn)化生長因子β1協(xié)同基質(zhì)細胞衍生因子1通過抑制β連環(huán)素活性影響肝卵圓細胞增殖.pdf

1、研究背景：
　　肝卵圓細胞（Hepatic oval cells）是肝臟內(nèi)的祖細胞，即肝干細胞的子代細胞，其起源于肝內(nèi)的終末膽管（Canal ofHering），具有分化為成熟的肝細胞和膽管上皮細胞的能力。在嚴重的肝臟疾病肝細胞再生能力受阻時，其啟動增殖、分化，代替肝細胞行使肝臟修復(fù)的功能。因此，闡明肝卵圓細胞增殖和分化過程中的關(guān)鍵性因素及其作用機制，對明確肝卵圓細胞與肝壞死、再生、纖維化等病理生理過程的關(guān)系，從而進一步達到有效促

2、進肝再生或改善移植肝細胞來源不足的問題，具有相當(dāng)重要的臨床意義。
　　基質(zhì)細胞衍生因子1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）是肝卵圓細胞參與的肝臟再生過程中關(guān)鍵的細胞因子，其能誘導(dǎo)干細胞遷移并參與增殖過程，但其發(fā)揮作用的具體機制尚未完全明確。另一方面，轉(zhuǎn)化生長因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）作為肝卵圓細胞增殖過程中的負向調(diào)控因子，同樣在肝再生過程中

3、發(fā)揮著重要作用。明確SDF-1對肝卵圓細胞的作用將幫助我們更好地認識肝卵圓細胞參與的肝再生過程，為有效調(diào)節(jié)肝卵圓細胞的增殖、分化提供理論基礎(chǔ)。
　　目的：
　　探討基質(zhì)細胞衍生因子1（SDF-1）在肝卵圓細胞增殖過程中的效應(yīng)、影響因素及作用機制。
　　方法：
　　1.體外培養(yǎng)大鼠肝卵圓細胞株（WB-F344），流式細胞術(shù)檢測細胞表面CXCR4的表達情況。
　　2.蛋白免疫印記技術(shù)（Western Blot）

4、檢測細胞中β連環(huán)素（β-catenin）蛋白磷酸化水平。
　　3.激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)β連環(huán)素的分布情況。
　　4.熒光定量PCR檢測經(jīng)典Wnt通路下游基因Ccnd1、c-Myc的表達。
　　5.將細胞分為空白對照組、基質(zhì)細胞衍生因子1（SDF-1）組、轉(zhuǎn)化生長因子β1（TGF-β1）組、SDF-1+TGF-β1組、SDF-1+ TGF-β1+AMD3100（CXCR4抑制劑）組，噻唑藍法檢測各組細胞增殖情況。<

5、br>　　結(jié)果
　　1.體外培養(yǎng)的WB-F344細胞中 CXCR4的表達量很低，而TGF-β1可上調(diào)WB-F344細胞CXCR4的表達（CXCR4陽性率上升39.5％）。
　　2.SDF-1可促進TGF-β1預(yù)處理肝卵圓細胞中β-catenin的磷酸化，促進β-catenin降解失活。
　　3.激光共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果顯示SDF-1結(jié)合于受體CXCR4使β-catenin入核減少。
　　4.核內(nèi)β-catenin

6、減少使下游基因 Ccnd1、c-Myc的表達下調(diào)。
　　5.200μg/L的SDF-1單獨作用72 h后WB-F344細胞的增殖情況（0.512±0.010）與空白對照組（0.513±0.008）相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.337，P>0.05）；5μg/L的TGF-β1可輕度抑制其增殖（0.393±0.007）（t=28.001，P<0.05）；而在SDF-1+TGF-B1組中，WB-F344細胞增殖能力較TGF-β1組進一步