白介素37對轉化生長因子β1誘導的大鼠肝星狀細胞的影響.pdf

1、目的:觀察重組人白細胞介素37(Interleukin37，IL-37)對轉化生長因子β1（Transform Growth Factor-beta1，TGF-β1）誘導的活化大鼠肝星狀細胞(rat hepatic stellate cell，HSC-T6)的增殖效應的影響，并觀察其對HSC-T6表達的纖溶酶原激活抑制物1(PlasminogenActivator Inhibitor1，PAI-1)和平滑肌肌動蛋白α(Smooth Mu

2、scle Actinα，SMA-α)表達的影響。初步探討IL-37可能的抗肝纖維化作用及其機制。
　　方法:1.不同細胞因子濃度培養(yǎng)基制備及實驗分組:以改良杜氏伊格爾培養(yǎng)基(Dulbecco's Modified EagleMedium，DMEM)為基礎液配制，實驗共分為5組，即空白對照組:僅含DMEM培養(yǎng)基;實驗組A:含TGF-β1(5ng/ml)，不含有重組IL-37b;實驗組B、實驗組C及實驗組D含有與A組相同濃度的TGF-

3、β1，且含有濃度梯度逐漸升高的重組人IL-37b(10ng/ml，100ng/ml，200ng/ml)。2.檢測HSC-T6增殖及目標蛋白表達:在各組不同細胞因子濃度作用下HSC-T6培養(yǎng)12h、24h、48h后，用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)檢測HSC增殖情況;細胞爬片后，繼續(xù)藥物作用24小時，用免疫組化法檢測不同組培養(yǎng)基作用后SMA-α、PAI-1表達情況。3.統(tǒng)計學處理:檢測相同時間下，不同藥物濃度細胞增殖情況及SMA-α、P

4、AI-1表達情況，采用單因素方差分析;B組、C組及D組間比較細胞增殖抑制率，采用兩因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。
　　結果:1.對HSC-T6增殖抑制作用:在重組人IL-37b與TGF-β1共培養(yǎng)12h、24h、48h后，B組、C組、D組HSC-T6吸光度均低于A組，P值均小于0.05，差異有統(tǒng)計學意義，表明不同濃度重組人IL-37b在12h、24h、48h均有對活化的大

5、鼠肝星狀細胞增殖的抑制作用。在不同時間點的組內(nèi)比較提示，在24h各組抑制作用明顯，且不同濃度的抑制率不同，為濃度越高，抑制率越明顯，P值＜0.001，有統(tǒng)計學差異;在12h不同藥物濃度組抑制率均低，且各組間抑制率差異無統(tǒng)計學意義，而在48h不同藥物組的抑制率均較高，且各組間抑制率差異無統(tǒng)計學意義，P值＞0.05，無明顯統(tǒng)計學差異。2.IL-37對活化的HSC-T6表達SMA-α的影響:在IL-37b干預組的B組、C組、D組SMA-α表達

6、量可較無IL-37b的A組干預組明顯減少，且存在有劑量效應關系，IL-37b濃度越高對SMA-α表達抑制作用越明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。3.IL-37對活化的HSC-T6表達PAI-1的影響:在IL-37b干預組的B組、C組、D組PAI-1表達量可較無IL-37b的A組干預組明顯減少，且存在有劑量效應關系，IL-37b濃度越高對PAI-1表達抑制作用越明顯，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:1.重組人IL-37b