血管緊張素-（1-7）對轉化生長因子-β-,1-誘導的大鼠腎小系膜細胞增殖的影響及其機制研究.pdf

1、目的:研究血管緊張素-(1-7)[Ang-(1-7)]對轉化生長因子β1(TGF-β1)誘導的大鼠腎小球系膜細胞(GMC)增殖的影響并初步探討其機制。 方法:將培養(yǎng)的大鼠腎系膜細胞用無血清的RPMI-1640培養(yǎng)液制成5×104/mL的細胞懸液，接種在96孔板中，每孔加入細胞懸液100μL無血清培養(yǎng)24小時，使其生長同步化。當細胞生長融合至70％左右時，按以下分組加入不同干預因素。A組(對照組):GMC培養(yǎng)液中不加入干預因素；B

2、組(TGF-β1組):GMC培養(yǎng)液中加入TGF-β1(終濃度5ng/ml；C組[Ang-(1-7)組]:GMC培養(yǎng)液中加入Ang-(1-7)(終濃度10-6 mol/L)；D組[TGF-β1+Ang-(1-7)組]:GMC培養(yǎng)液中加入TGF-β1(終濃度5ng/ml)及Ang-(1-7)(終濃度10-6m0l/L)。(1)WST法檢測GMC增殖；藥物干預24小時后，每孔加入WST 10μL，37℃繼續(xù)孵育4h，在酶聯免疫檢測儀上490n

3、m波長處測定OD值。(2)RT-PCR法檢測Smad3/7及CTGF等基因mRNA的表達。實驗分組及藥物干預濃度同上，將培養(yǎng)的GMC接種在6孔板中，當細胞生長融合至70％左右時進行藥物干預，干預24小時后，按RNA提取試劑盒說明書提取各組細胞總RNA，逆轉錄為cDNA后進行PCR反應。PCR反應結束后取產物15μL于1.5％瓊脂糖凝膠中以100V電壓進行電泳，5×TBE作為電泳緩沖液，電泳時間為40min，用凝膠成像掃描及分析系統(tǒng)，測定

4、各組目的基因與內參基因的積分光密度比值。實驗結果用均數士標準差(X±S)表示，采用單因素方差分析(F檢驗和q檢驗)進行組間比較，P<0.05表示差異有顯著性。采用SPSS10.0軟件進行統(tǒng)計學分析。結果:(1)WST法檢測GMC增殖結果:與對照組相比，TGF-β1(5ng/ml)可明顯促進GMC增殖(P<0.05)；Ang-(1-7)(10-6mol/L)則可明顯抑制基礎狀態(tài)下的GMC增殖(P<0.05)；同時Ang-(1-7)對TGF

5、-β1的促細胞增殖作用也有顯著的抑制作用(P<0.05)；(2)Smad3/7，CTGF mRNA表達結果:與對照組相比，TGF-β1(5ng/ml)可明顯促進GMC Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表達(P<0.05)；Ang-(1-7)(10-6mol/L)則明顯抑制基礎狀態(tài)下GMC Smad3，CTGF mRNA的表達(P<0.05)，但對基礎狀態(tài)下的Smad7 mRNA表達無明顯的影響(P>0.05)；Ang-(1-

6、7)對TGF-β1所誘導的Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表達均有明顯的抑制作用(P<0.05)。結論:①Ang-(1-7)可抑制基礎狀態(tài)下及TGF-β1誘導的GMC增殖。②Ang-(1-7)可抑制基礎狀態(tài)下Smad3，CTGF mRNA的表達，但對基礎狀態(tài)下的Smad7 mRNA表達無明顯抑制作用。③Ang-(1-7)可抑制TGF-β1誘導的Smad3，Smad7，CTGF mRNA的表達。④Ang-(1-7)通過非特異性