α-亞麻酸對轉(zhuǎn)化生長因子β1所誘導(dǎo)的肝星狀細胞的影響.pdf

1、[目的]
　　 1.利用α-亞麻酸(ALA)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)同時干預(yù)肝星狀細胞(HSC)，探討干預(yù)前后HSC增殖及分泌功能。
　　 2.比較干預(yù)后各計量對增殖及分泌功能影響程度，并探討其可能的作用機制。
　　 [方法]
　　 1.采用活化的肝星狀細胞作為研究模型，將傳代的細胞分為5組，分別是A組（空白對照組）、B組(TGF-β15ng/ml)、C組(TGF-β15ng/ml+ALA50

2、mmol/L)、D組(TGF-β15ng/ml+ALA150 mmol/L)、E組(TGF-β15ng/ml+ALA250mmol/L)。
　　 2.MTT比色法檢測α-亞麻酸對HSC的增殖效應(yīng)，并確定α-亞麻酸的有效濃度。
　　 3.細胞貼壁培養(yǎng)24小時后，分組加入不同試劑及MTT液培養(yǎng)4小時，以MTT法檢測細胞增殖活性。
　　 4.經(jīng)上訴分組及處理，收集藥物處理后上清液，以ELASA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中Ⅰ型

3、及Ⅲ型膠原的含量。
　　 5.收集各組細胞以Western blot法檢測ALA對TGF-β1誘導(dǎo)的HSC表達的α-平滑肌肌動蛋白(α-SMA)的影響。
　　 [結(jié)果]
　　 (1)組間比較F=25.07，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。LSD法多重比較可以發(fā)現(xiàn)ALA對HSC的增殖有抑制作用（B、C、D、E四組各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，A組與E組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05），并呈劑量依賴性，A組

4、與E組間無統(tǒng)計學(xué)差異可能為ALA對HSC的抑制作用與TGF-β1對HSC的增殖作用相互抵消所致。TGF-β1對HSC的增殖有促進作用（A組與B、C、D組比較，P＜0.05）。
　　 (2)Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白的表達:Ⅰ型膠原纖維蛋白組間比較，F(xiàn)=19.41，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義;Ⅲ型膠原纖維蛋白組間比較，F(xiàn)=16.66，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，抑制作用呈劑量依賴性(P＜0.05)。LSD法多重比較可以發(fā)現(xiàn)TGF-

5、β1可促進HSC分泌Ⅰ型及Ⅲ型(P＜0.01)，而ALA對Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白的分泌均有一定的抑制作用（B、C、D、E四組各組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05，A組與E組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＞0.05，A組與E組間無統(tǒng)計學(xué)差異可能為ALA對HSC的抑制作用與TGF-β1對HSC的增殖作用相互抵消所致），并呈劑量依賴性（P＜0.05）。
　　 (3) Western blot檢測α-SMA的表達:α-SMA組間比較F=226.31

6、，P＜0.01，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。LSD法檢驗可以看出TGF-β1能明顯促進HSC表達α-SMA(P＜0.01)，經(jīng)ALA作用后，TGF-β1誘導(dǎo)的α-SMA表達受到抑制并呈劑量依賴性(P＜0.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.TGF-β1能誘導(dǎo)HSC增殖，并使其分泌膠原能力增加，提示TGF-β1可能為肝纖維化發(fā)展過程中起重要作用。
　　 2.α-亞麻酸在高濃度(150、250 mmol/L)時對TGF-β1能