黃芩苷對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1誘導(dǎo)的人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的干預(yù)作用.pdf

1、[目的]
　　 黃芩苷作為黃芩的有效提取成分之一，其在擴(kuò)張血管和抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖方面有較強(qiáng)的藥理作用，然而它防治肺動(dòng)脈高壓和干預(yù)肺血管重構(gòu)的功能尚不清楚。本研究通過轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(transforming growth factorβ1，TGF-β1)誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(HPASMCs)增殖，建立HPASMCs過度增殖的細(xì)胞模型，進(jìn)而探討不同濃度、作用時(shí)間的黃芩苷對(duì)其增殖干預(yù)的作用和可能的分子機(jī)制。
　　

2、[方法]
　　 1.收集肺動(dòng)脈高壓患者的肺組織，分別采用免疫熒光和免疫組化方法檢測(cè)肺血管組織和HPASMCs中缺氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor1 alpha，HIF1α)、芳香族化合物受體(aryl hydrocarbon receptor, AhR)的表達(dá)和亞細(xì)胞定位。
　　 2.將HPASMCs細(xì)胞用含10％胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基傳代培養(yǎng)，細(xì)胞免疫熒光方法鑒定，實(shí)驗(yàn)分為5組:空

3、白對(duì)照組、TGF-β1組(TGF-β110μg/l)、干預(yù)1組（TGF-β110μg/l+黃芩苷5μmol/l）、干預(yù)2組(TGF-β110μg/l+黃芩苷10μmol/l)、干預(yù)3組（TGF-β110μg/l+黃芩苷20μmol/l）、干預(yù)4組（TGF-β110μ g/l+黃芩苷40μmol/l），在激光共聚焦顯微鏡下觀察TGF-β1誘導(dǎo)下細(xì)胞形態(tài)和表型的改變，并通過CCK-8法檢測(cè)黃芩苷對(duì)細(xì)胞增殖的影響，RT-PCR檢測(cè)增殖相關(guān)基因

4、HIF1α、AhR的表達(dá)變化。
　　 [結(jié)果]
　　 1.明確了肺動(dòng)脈高壓患者肺組織及HPASMCs中AhR、HIF1α的表達(dá)及其在細(xì)胞質(zhì)中定位情況。
　　 2.CCK-8結(jié)果顯示，10μg/l的TGF-β1處理48 h的條件對(duì)HPASMCs增殖的誘導(dǎo)效果最為明顯。
　　 3.細(xì)胞免疫熒光可見經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)的HPASMCs合成型標(biāo)志物分泌磷酸蛋白1(secreted phosphoprotein1，S

5、PP1)明顯表達(dá)。
　　 4.CCK-8結(jié)果顯示，黃芩苷可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的HPASMCs增殖，并呈依賴于劑量和時(shí)間的量效關(guān)系。
　　 5.RT-PCR結(jié)果顯示，黃芩苷呈濃度依賴性抑制HPASMCs中AhR、HIF1α的表達(dá)。
　　 [結(jié)論]
　　 肺動(dòng)脈高壓患者肺組織及HPASMCs中有HIF1α、AhR的表達(dá)，TGF-β1可誘導(dǎo)HPASMCs的增殖，以10μ g/l濃度作用48 h條件下的效果最為