白介素-37對轉化生長因子-β1活化的人肝星狀細胞的影響.pdf

1、目的:1.利用重組人白細胞介素-37（interleukin-37，IL-37）和轉化生長因子-β1(transforming growth factor-beta1，TGF-β1)同時干預人LX2-肝星狀細胞（LX2-hepatic stellate cell，LX2-HSC），觀察重組人IL-37對TGF-β1誘導活化的人LX2-HSC的增殖及凋亡的影響，并觀察其對人LX2-HSC表達的Ⅰ型膠原蛋白(collagen I，Col-Ⅰ

2、)、Ⅲ型膠原蛋白(collagenⅢ，Col-Ⅲ)的影響。2.初步探討重組人IL-37抗肝纖維化的作用及機制。
　　方法:1.細胞培養(yǎng):以RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)人LX2-HSC。2.實驗分組:(1)空白對照組（A組）:只含有RPMI-1640培養(yǎng)基;(2)實驗對照組（B組）:含TGF-β15ng/ml，不含重組人IL-37;(3)實驗組（C組）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37100ng/ml;(4)實驗組（D組

3、）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37200ng/ml;(5)實驗組（E組）:含TGF-β15ng/ml、重組人IL-37400ng/ml。3.檢測人LX2-HSC的細胞吸光度并計算細胞增殖抑制率，檢測細胞凋亡率及Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的表達:在各組不同濃度重組入IL-37作用下的人LX2-HSC分別培養(yǎng)12h、24h、48h后，用MTT法檢測人LX2-HSC的增殖情況，測量各組細胞吸光度，并通過細胞吸光度計算各組細胞增殖抑制

4、率;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染細胞后用流式細胞儀檢測各組細胞凋亡率;相同方法培養(yǎng)人LX2-HSC，收集藥物處理后的細胞上清液，用酶聯免疫吸附實驗（ELISA法）檢測培養(yǎng)細胞上清液中Col-Ⅰ及Col-Ⅲ的濃度。4.統計學處理:兩個隨機獨立樣本均數比較用t檢驗;多個樣本均數比較用單因素方差分析;多個樣本均數之間的兩兩比較用LSD法;結果均以P＜0.05為有統計學差異。采用SPSS17.0的統計軟件分析所有數據。
　　結果:

5、1.對人LX2-HSC的增殖抑制作用:在重組人IL-37與TGF-β1共培養(yǎng)12h、24h、48h后，各時間點A組與B組細胞吸光度比較，有統計學差異(P＜0.05)，且B組細胞吸光度高于A組;B組、C組、D組、E組細胞吸光度及增殖抑制率比較，有統計學差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細胞吸光度降低，細胞增殖抑制率增加;12h和24h時C組與D組、E組的細胞吸光度及細胞增殖抑制率比較均有統計學差異(P＜0.05)，

6、D組與E組的細胞吸光度及細胞增殖抑制率比較均無統計學差異(P＞0.05);而48h時C組、D組、E組的細胞吸光度及細胞增殖抑制率比較均無統計學差異(P＞0.05)。相同藥物濃度組各時間點的比較，結果顯示各藥物濃度組在各時間點的細胞吸光度及細胞增殖抑制率比較均有統計學差異（P＜0.05），且隨著培養(yǎng)時間延長，各組細胞吸光度降低、細胞增殖抑制率增加。2.對人LX2-HSC凋亡率的影響:各時間點A組與B組細胞凋亡率比較，有統計學差異(P＜0.

7、05)，且B組細胞凋亡率低于A組;B組、C組、D組、E組的細胞凋亡率比較，有統計學差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細胞凋亡率增高;12h和24h時C組與D組、E組的細胞凋亡率比較均有統計學差異（P＜0.05），D組與E組的細胞凋亡率比較均無統計學差異(P＞0.05);而48h時C組、D組、E組的細胞凋亡率比較均無統計學差異(P＞0.05)。相同藥物濃度組各時間點的比較，結果顯示各藥物濃度組在各時間點之間的細胞凋

8、亡率的比較均有統計學差異(P＜0.05)，且隨著培養(yǎng)時間延長，各組細胞凋亡率也增加。3.對人LX2-HSC表達Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的影響:各時間點A組與B組的Col-Ⅰ及Col-Ⅲ濃度比較，有統計學差異(P＜0.05)，且B組的濃度高于A組;B組、C組、D組、E組的Col-Ⅰ及Col-Ⅲ濃度比較，有統計學差異(P＜0.05)，且隨著重組人IL-37濃度增加，各組細胞表達Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度減少，但重組人IL-37干預的C組、D

9、組、E組表達的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度無統計學差異(P＞0.05)。各藥物濃度組各時間點之間的比較結果顯示均無統計學差異(P＞0.05)，即本實驗所設置的培養(yǎng)時間內人LX2-HSC所表達的Col-Ⅰ、Col-Ⅲ的濃度還未呈現出統計學差異。
　　結論:1.5ng/ml TGF-β1可促進人LX2-HSC增殖、促進入LX2-HSC表達Col-Ⅰ和Col-Ⅲ。2.重組人IL-37可抑制TGF-β1活化的人LX2-HSC的增殖。3.重