內(nèi)毒素對(duì)肝星狀細(xì)胞表達(dá)結(jié)締組織生長因子的影響.pdf

1、【目的】建立經(jīng)濟(jì)簡便穩(wěn)定的同步分離培養(yǎng)大鼠肝星狀細(xì)胞(hepaticstellatecells,HSCs)與枯否細(xì)胞(kupffercells，KCs)方法，為研究肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞生物學(xué)特性及肝纖維化(HF)的發(fā)生機(jī)制提供細(xì)胞學(xué)方法基礎(chǔ)。
　　【方法】采用鏈霉蛋白酶、Ⅳ型膠原酶離體灌流，10.387％與18.8％Nycodenz密度梯度高速(20000r/min)離心分離培養(yǎng)SD大鼠原代肝星狀細(xì)胞、kupffer細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)拒

2、染實(shí)驗(yàn)鑒定細(xì)胞活率。通過結(jié)蛋白(desmin)、平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法鑒定HSCs。采用溶菌酶(lysozyme)免疫細(xì)胞化學(xué)法與印度墨汁吞噬功能實(shí)驗(yàn)鑒定KCs。
　　【結(jié)果】成功同步分離培養(yǎng)大鼠HSCs、KCs，免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法證實(shí)所分離的細(xì)胞分別為肝星狀細(xì)胞和kupffer細(xì)胞，且kupffer細(xì)胞吞噬功能明顯。每只大鼠的HSCs和KCs的細(xì)胞得率分別為2.0×107/肝和1.2×107/肝，

3、平均純度分別為93％、91％，活率分別為92％、94％。
　　【結(jié)論】本實(shí)驗(yàn)同步分離培養(yǎng)大鼠肝KCs和HSCs的方法簡便經(jīng)濟(jì)，細(xì)胞得率、活率和純度高，能用于肝纖維化機(jī)制的研究。
　　【目的】研究內(nèi)毒素脂多糖(LPS)與其刺激的kupffer細(xì)胞(KCs)培養(yǎng)上清(KCCM)及吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(PDTC，NF-kB通路抑制劑)對(duì)大鼠原代肝星狀細(xì)胞(HSCs)表達(dá)結(jié)締組織生長因子(CTGF)的影響，探討LPS刺激HSCs表

4、達(dá)CTGF的機(jī)制。
　　【方法】培養(yǎng)72h的KCs經(jīng)1mg/LLPS刺激48h后收集上清標(biāo)記為KCCM1，未經(jīng)LPS刺激的上清標(biāo)記為KCCM0。將培養(yǎng)72h的HSCs隨機(jī)分為空白對(duì)照組、KCCM0組、LPS組、KCCM1組、PDTC組、PDTC＋LPS組、PDTC＋KCCM1組。各組HSCs經(jīng)相應(yīng)的處理48h后，westernblot檢測(cè)各組HSCs表達(dá)CTGF水平，ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清中Ⅰ型膠原含量。
　　【結(jié)果】各組H

5、SCs中CTGF含量為：空白對(duì)照組(1.95±0.67)、KCCM0(2.15±1.10）、LPS(4.56±4.16）、KCCM1(5.21±3.23）、PDTC(0.06±0.02）、PDTC＋LPS(0.10±0.08）、PDTC＋KCCM1(2.77±4.08）。與空白對(duì)照組相比，LPS與KCCM1作用于HSCs后CTGF表達(dá)增加(P＜0.05），PDTC與PDTC＋LPS處理的HSCs中CTGF表達(dá)明顯下降(P＜0.01）。P