CTGFshRNA對人翼狀胬肉成纖維細(xì)胞結(jié)締組織生長因子和膠原表達(dá)的影響.pdf

1、[目的]
　　 CTGF(Connective tissue growth factor CTGF)作為TGF-β致纖維化作用的直接下游效應(yīng)介質(zhì)，促進(jìn)胬肉組織中成纖維細(xì)胞增殖，并且是Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原表達(dá)的介導(dǎo)者促進(jìn)翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展。它的促纖維化作用受到人們的重視。抑制其表達(dá)成為人們研究抑制纖維化疾病治療的靶點(diǎn)。本研究應(yīng)用結(jié)締組織生長因子短發(fā)夾RNA(CTGFshRNA)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染翼狀胬肉成纖維細(xì)胞，研究其對CTGF、Ⅰ型膠

2、原、Ⅲ型膠原表達(dá)的影響。
　　 [方法]
　　 通過組織培養(yǎng)法獲得翼狀胬肉成纖維細(xì)胞并進(jìn)行純化用免疫組織化學(xué)的方法鑒定，取3-6代細(xì)胞分為三個(gè)時(shí)間段，每個(gè)時(shí)間段設(shè)三個(gè)對照組，將已構(gòu)建成功含有綠色熒光蛋白(EGFP)的CTGFshRNA質(zhì)粒以轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine2000按比例為1:2:5轉(zhuǎn)染胬肉成纖維細(xì)胞。收集細(xì)胞提取蛋白質(zhì)和RNA，應(yīng)用WesternBlotting檢測翼狀胬肉成纖維細(xì)胞中CTGF蛋白質(zhì)表達(dá)

3、。用應(yīng)用Real-timeqRT-PCR和RT-PCR技術(shù)分別檢測翼狀胬肉成纖維細(xì)胞中Ⅰ型膠原mRNA、Ⅲ型膠原mRNA表達(dá)水平。
　　 [結(jié)果]
　　 通過組織培養(yǎng)獲得細(xì)胞抗波形蛋白陽性，符合成纖維細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及免疫學(xué)特征。各實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比CTGFshRNA表達(dá)載體組的24h、48h、72h CTGF蛋白質(zhì)表達(dá)降低約(634±4)％、(74±5)％、和(36±7)％(P<0.01)。Ⅰ型膠原mRNA分別降低(4