阿托伐他汀對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β-,1-誘導(dǎo)的大鼠肺肌成纖細(xì)胞分化的影響.pdf

1、目的: 肺間質(zhì)纖維化是一種病因未明，發(fā)病機(jī)制不清，缺乏治療手段的致命性肺間質(zhì)疾病，肺間質(zhì)纖維化的病理特征是肺泡上皮細(xì)胞損傷，成纖維細(xì)胞灶的形成以及細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的過度沉積，最終導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)的異常重構(gòu)。近年來的研究發(fā)現(xiàn)成纖維細(xì)胞灶主要由表達(dá)α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的肌成纖維細(xì)胞構(gòu)成，是造成ECM異常沉積的主要細(xì)胞。同時(shí)研究證實(shí)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)是關(guān)鍵的致纖維化細(xì)胞因子，可以誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向肌成纖維細(xì)

2、胞分化。近年來的研究證實(shí)，他汀類藥物在體外可抑制成纖維細(xì)胞的增殖和膠原的合成，在肺間質(zhì)纖維化的治療中顯示出了令人鼓舞的傾向，但是機(jī)制尚不明確。本實(shí)驗(yàn)研究以TGF-β1誘導(dǎo)肌成纖維細(xì)胞的分化作為切入點(diǎn)，觀察經(jīng)阿托伐他汀干預(yù)后，肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志性產(chǎn)物α-SMA的改變及TGF-β1誘導(dǎo)基質(zhì)Ⅰ型膠原表達(dá)等指標(biāo)的變化，進(jìn)一步探索他汀類藥物抑制肺纖維化的機(jī)制。 材料與方法: 氣管內(nèi)注入博萊霉素(BLM)復(fù)制大鼠肺纖維化模型，作為實(shí)

3、驗(yàn)組，應(yīng)用氣管內(nèi)注入生理鹽水作為對(duì)照組，并分離培養(yǎng)肺成纖維細(xì)胞，待細(xì)胞自然純化至第四代時(shí)，用阿托伐他汀對(duì)其進(jìn)行干預(yù)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組分別分為空白對(duì)照亞組、TGF-β1誘導(dǎo)亞組和不同劑量阿托伐他汀亞組，用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，MTT計(jì)數(shù)法觀察各組細(xì)胞的增殖情況，免疫組織化學(xué)法定性觀察α-SMA的表達(dá)情況，ELISA法測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清液中Ⅰ型膠原含量。 結(jié)果: 生理鹽水對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，細(xì)胞小且胞漿清晰，細(xì)胞生長(zhǎng)比較

4、慢，傳代后生長(zhǎng)速度增快。博萊霉素實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞與對(duì)照組相比，細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞比較大，且生長(zhǎng)速度明顯快于對(duì)照組。阿托伐他汀對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺肌成纖維細(xì)胞標(biāo)志性產(chǎn)物α-SMA具有抑制作用。阿托伐他汀能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺肌成纖維細(xì)胞的增殖。阿托伐他汀5μmol/L亞組和阿托伐他汀10μmol/L亞組的細(xì)胞生長(zhǎng)明顯被抑制，細(xì)胞數(shù)降至70％以上，阿托伐他汀0.1μmol/L亞組與阿托伐他汀1μmol/L亞組的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制不明顯

5、，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。阿托伐他汀能抑制TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺肌成纖維細(xì)胞分泌的I型膠原。阿托伐他汀5gmol/L亞組和阿托伐他汀10μmol/L亞組的細(xì)胞Ⅱ型膠原表達(dá)明顯減少，可達(dá)50％以下，阿托伐他汀0.1μmol/L亞組與阿托伐他汀1μmol/L亞組的細(xì)胞表達(dá)Ⅰ型膠原略有下降，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論: 阿托伐他汀能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肌成纖維細(xì)胞的分化，主要表現(xiàn)在細(xì)胞增殖情況以及肌成纖維細(xì)胞的標(biāo)志性產(chǎn)物α-SMA表達(dá)