三氧化二砷對轉(zhuǎn)化生長-β1因子誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌的影響.pdf

1、目的：
　　 肺間質(zhì)纖維化是許多肺部疾病終末期共同的改變，死亡率高，并且缺乏有效治療手段。其發(fā)病機制尚不清楚，目前主要認為在肺纖維化發(fā)病的起始階段大量炎性細胞被活化并向肺內(nèi)浸潤，伴隨著多種細胞因子的釋放，形成連鎖放大性質(zhì)的瀑布效應(yīng)，激活多種細胞，誘導(dǎo)肺組織內(nèi)成纖維細胞的活化與增殖，并且分泌細胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，最終導(dǎo)致肺纖維化的形成。在這個病理過程中，轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transfor

2、ming growth factor-beta1，TGF-β1)被認為是最重要的細胞因子，它可以誘導(dǎo)成纖維細胞向表達α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscle actin.α-SMA)的肌成纖維細胞分化。而肺成纖維細胞膠原分泌增多造成。ECM異常沉積也被認為是肺纖維化的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，其中Ⅰ、Ⅲ型膠原是主要成分，占ECM的絕大多數(shù)。減少肺成纖維細胞膠原的分泌，被認為可能是治療肺纖維化的有效方式。我科前期研究發(fā)現(xiàn)三氧化二砷能夠誘導(dǎo)早期博

3、萊霉素致纖維化大鼠的肺組織中炎性細胞凋亡，并且降低肺纖維化大鼠肺組織中羥脯氨酸含量，減少肺組織中的膠原沉積，從而減輕肺纖維化進展。那么三氧化二砷的作用機理究竟如何?其減輕肺纖維化的作用是否通過抑制TGF-β1誘導(dǎo)的成纖維細胞增殖從而減少了膠原分泌?這些問題即是本課題研究的重點，擬通過探討三氧化二砷對TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細胞增殖與Ⅰ、Ⅲ型膠原分泌的影響，闡明三氧化二砷治療肺纖維化的部分作用機制。
　　 材料與方法：

4、>　　 分離培養(yǎng)正常健康大鼠的肺組織的成纖維細胞，取自然純化至第四代的細胞用于實驗。采用TGF-β1對成纖維細胞進行誘導(dǎo)，之后分別予以不同濃度的三氧化二砷進行干預(yù)，觀察干預(yù)后12h、24h、48h的成纖維細胞增殖情況，分別與對照組的細胞進行比較。用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)和結(jié)構(gòu)，MTT計數(shù)方法觀察各組細胞的增殖情況，熒光定量PCR方法觀察各組細胞α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA的表達情況。
　　 結(jié)果：
　　 (1)原

5、代離體培養(yǎng)的正常肺成纖維細胞在倒置顯微鏡下呈細長梭形，排列緊密、具有方向一致性，角蛋白免疫細胞化學(xué)染色顯示為陰性，波形纖維蛋白免疫細胞化學(xué)染色顯示為陽性，證實為成纖維細胞。(2)三氧化二砷可以抑制TGF-β1誘導(dǎo)的大鼠肺成纖維細胞的增殖；三氧化二砷1uM/L和2uM/L濃度組的細胞生長明顯受抑制，細胞增殖抑制率最高達到50％以上(p<0.05)；肌成纖維細胞的標志物α-SMA的mRNA表達量也隨之減少，最多可減少51.8％(p<0.05

6、)。(3)三氧化二砷能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺肌成纖維細胞分泌Ⅰ、Ⅲ型膠原；三氧化二砷1uM/L組和三氧化二砷2uM/L組細胞Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達量明顯減少，最多可減少50％以上(P<0.05)。三氧化二砷濃度、肌成纖維細胞的標志物α-SMA的mRNA表達量、Ⅰ、Ⅲ型膠原mRNA表達量之間呈現(xiàn)明顯的量效關(guān)系。
　　 結(jié)論：
　　 三氧化二砷能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的肺成纖維細胞的增殖；同時三氧化二砷能夠減少TGF-