bFGF、EGF及復(fù)合因子誘導(dǎo)大鼠BMSCs向成纖維細胞增殖分化的實驗.pdf

1、目的:
　　研究含不同濃度的EGF和bFGF及各組組合濃度復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液對大鼠BMSCs向成纖維細胞的增殖分化作用。探討生長因子體外誘導(dǎo)BMSCs增殖分化的的最佳種類及濃度，為構(gòu)建組織工程韌帶提供理想的種子細胞來源。
　　方法:
　　1貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，倒置顯微鏡下觀察細胞生長增殖情況，MTT測定骨髓間充質(zhì)干細胞原代及傳代1~8天增殖情況，免疫組化對骨髓間充質(zhì)干細胞進行鑒定。
　　2含2ng/m

2、l、20ng/ml的bFGF、EGF及組合濃度的復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液代替正常培養(yǎng)液對第三代骨髓間充質(zhì)干細胞進行誘導(dǎo)分化，MTT檢測不同誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后細胞增殖情況，免疫組化對誘導(dǎo)后成纖維細胞進行鑒定。
　　結(jié)果:
　　1倒置顯微鏡下觀察，骨髓間充質(zhì)干細胞24h后開始貼壁，形狀由圓形變?yōu)樗笮危毎嗣黠@，胞漿比較大；骨髓間充質(zhì)干細胞傳三代后細胞呈梭形，少數(shù)為多角形，細胞融合后細胞呈渦旋或放射狀排列。
　　2 MTT檢測結(jié)果顯示

3、：骨髓間充質(zhì)干細胞呈“S”形曲線生長。原代細胞第二天進入對數(shù)生長期，傳代細胞第四天進入對數(shù)生長期。
　　3免疫組化結(jié)果顯示：骨髓間充質(zhì)細胞表面抗原CD34和Laminin表達為陰性，Vimatin和α-SMA為陽性表達；誘導(dǎo)后，細胞Laminin表達轉(zhuǎn)為陽性。
　　4 MTT（7、14天）和免疫組化結(jié)果表明：
　　① bFGF或EGF以及復(fù)合因子均能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞成功分化為成纖維細胞；
　　②相同濃度的bF

4、GF組和EGF組之間誘導(dǎo)效果比較無顯著性差異；
　?、鄣蜐舛日T導(dǎo)組2ng/mlbFGF組、2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF+2ng/mlEGF組與對照組相比無顯著性差異；
　?、芨邼舛日T導(dǎo)組20ng/ml bFGF組、20ng/ml EGF組、20ng/ml bFGF+2ng/ml EGF組、和較對照組增殖顯著加快，誘導(dǎo)分化為成纖維細胞的能力最強，但高濃度組之間無顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1全骨