bFGF、EGF及復(fù)合因子誘導(dǎo)大鼠BMSCs向成纖維細(xì)胞增殖分化的實(shí)驗(yàn).pdf

1、目的:
　　研究含不同濃度的EGF和bFGF及各組組合濃度復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液對(duì)大鼠BMSCs向成纖維細(xì)胞的增殖分化作用。探討生長(zhǎng)因子體外誘導(dǎo)BMSCs增殖分化的的最佳種類(lèi)及濃度，為構(gòu)建組織工程韌帶提供理想的種子細(xì)胞來(lái)源。
　　方法:
　　1貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況，MTT測(cè)定骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代及傳代1~8天增殖情況，免疫組化對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　2含2ng/m

2、l、20ng/ml的bFGF、EGF及組合濃度的復(fù)合因子誘導(dǎo)培養(yǎng)液代替正常培養(yǎng)液對(duì)第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行誘導(dǎo)分化，MTT檢測(cè)不同誘導(dǎo)液誘導(dǎo)后細(xì)胞增殖情況，免疫組化對(duì)誘導(dǎo)后成纖維細(xì)胞進(jìn)行鑒定。
　　結(jié)果:
　　1倒置顯微鏡下觀察，骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞24h后開(kāi)始貼壁，形狀由圓形變?yōu)樗笮?，?xì)胞核明顯，胞漿比較大；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞傳三代后細(xì)胞呈梭形，少數(shù)為多角形，細(xì)胞融合后細(xì)胞呈渦旋或放射狀排列。
　　2 MTT檢測(cè)結(jié)果顯示

3、：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈“S”形曲線生長(zhǎng)。原代細(xì)胞第二天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，傳代細(xì)胞第四天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。
　　3免疫組化結(jié)果顯示：骨髓間充質(zhì)細(xì)胞表面抗原CD34和Laminin表達(dá)為陰性，Vimatin和α-SMA為陽(yáng)性表達(dá)；誘導(dǎo)后，細(xì)胞Laminin表達(dá)轉(zhuǎn)為陽(yáng)性。
　　4 MTT（7、14天）和免疫組化結(jié)果表明：
　　① bFGF或EGF以及復(fù)合因子均能誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成功分化為成纖維細(xì)胞；
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4、GF組和EGF組之間誘導(dǎo)效果比較無(wú)顯著性差異；
　?、鄣蜐舛日T導(dǎo)組2ng/mlbFGF組、2ng/ml EGF組、2ng/ml bFGF+2ng/mlEGF組與對(duì)照組相比無(wú)顯著性差異；
　?、芨邼舛日T導(dǎo)組20ng/ml bFGF組、20ng/ml EGF組、20ng/ml bFGF+2ng/ml EGF組、和較對(duì)照組增殖顯著加快，誘導(dǎo)分化為成纖維細(xì)胞的能力最強(qiáng)，但高濃度組之間無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1全骨