血管緊張素-(1-7)對(duì)TGF-β-,1-誘導(dǎo)大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響.pdf

1、目的：觀察血管緊張素-（1-7）對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)幼年大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響，并探討其是否通過cAMP/PKA通路進(jìn)行介導(dǎo)抗纖維化作用。 方法：⑴細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定：用酶消化法分離細(xì)胞，差速貼壁法純化獲得心室肌成纖維細(xì)胞為材料，用光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定細(xì)胞。⑵檢測(cè)方法：WST-1比色法測(cè)定細(xì)胞增殖情況，放射免疫法測(cè)定Ⅲ型膠原前體序列（PCⅢ）的含量。⑶實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)不同藥物及藥物不同濃度，將實(shí)驗(yàn)共分四

2、部分：①觀察Ang-（1-7）對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞是否有影響。共分5組：不同濃度（10-9-10-6M）Ang-（1-7）組和空白對(duì)照組。②觀察Ang-（1-7）對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)下對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響。空白對(duì)照組，TGF-β1組，不同濃度的Ang-（1-7）（10-9-10-6mol/L）+TGF-β1組。③H-89對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞的影響?？瞻讓?duì)照組，Ang-（1-7）組，H-89組，H-89+Ang-（1-7）組

3、。④H-89對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)下對(duì)心肌成纖維細(xì)胞的影響；分5組。空白對(duì)照組，TGF-β1組，TGF-β1組+H-89組，TGF-β1+Ang-（1-7）組，TGF-β1+Ang-（1-7）+H-89組。⑷數(shù)據(jù)處理：用SPSS13.0軟件包；細(xì)胞活度OD值（吸光度）數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，單因數(shù)方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩兩比較采用LSD法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：①培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化

4、學(xué)的方法鑒定為心肌成纖維細(xì)胞，純度95%以上。②Ang-（1-7）在基礎(chǔ)狀態(tài)下呈濃度依賴性抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖和PCⅢ的合成。Ang-（1-7）各濃度組（10-9-10-6mol/L）OD值及PCⅢ的合成明顯高于空白對(duì)照組（P<0.05），OD值及Pcm的合成隨濃度的增加而降低，各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。③Ang-（1-7）呈濃度依賴性地抑制TGF-β1的誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞增殖及膠原PCⅢ的合成作用。④Ang

5、-（1-7）在cAMP/PKA通路的研究。1）PKA抑制劑H-89能阻斷Ang-（1-7）對(duì)TGF-β1的抑制細(xì)胞增殖和膠原PCⅢ的合成作用，與TGF-β1+ Ang-（1-7）及空白對(duì)照組比較P<0.05，與TGF-β1組比較無明顯差異（P>0.05）。⑤基礎(chǔ)狀態(tài)下，H-89能阻斷Ang-（1-7）對(duì)細(xì)胞增殖和膠原PCⅢ合成抑制作用，與Ang-（1-7）組比較差異明顯P<0.05，與空白組對(duì)照比較無明顯差異。 結(jié)論：⑴Ang-