血管緊張素-（1～7）對(duì)大鼠心肌成纖維細(xì)胞TGF-β-Smad通路的影響.pdf

1、目的：觀察血管緊張素-(1-7)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)幼年大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響，并探討其是否通過TGF-β/Smad通路。 方法：1.細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定：用酶消化法分離細(xì)胞，差速貼壁法純化獲得心室肌成纖維細(xì)胞為材料，用光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定細(xì)胞。2.檢測(cè)方法：wst-1比色法測(cè)定細(xì)胞增殖情況，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)方法檢測(cè)細(xì)胞中smad3蛋白和smad7蛋白mRNA的表達(dá)變化。3.實(shí)驗(yàn)分組：根據(jù)不同

2、藥物及藥物不同濃度，將實(shí)驗(yàn)共分三部分，第一部分：觀察Ang-(1-7)對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下的心肌成纖維細(xì)胞是否有影響。共分5組：不同濃度(10-9-10-6M)Ang-(1-7)組和空白對(duì)照組。第二部分：觀察Ang-(1-7)對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞增殖的影響?？瞻讓?duì)照組，TGF-β1誘導(dǎo)增殖對(duì)照組，不同濃度的Ang-(1-7)(10-9-10-6mol/L)+TGF-β1組，Ang-(1-7)+SB431542組。第三部分：Ang-(

3、1-7)對(duì)TGF-β/Smad通路的影響。空白對(duì)照組，TGF-β1誘導(dǎo)增殖對(duì)照組，Ang-(1-7)組，Ang-(1-7)+TGF-β1組，Ang-(1-7)+SB431542組。4.數(shù)據(jù)處理：用SPSS12.0軟件包；細(xì)胞活度OD值數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，單因數(shù)方差分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，卡方檢驗(yàn)，兩兩比較采用標(biāo)準(zhǔn)四格表法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：1.培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)過光學(xué)顯微鏡和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法鑒定為心肌成纖

4、維細(xì)胞，純度95％以上。2.Ang-(1-7)在基礎(chǔ)狀態(tài)下呈濃度依賴性抑制心肌成纖維細(xì)胞增殖。Ang-(1-7)各濃度組(10-9-10-6mol/L)OD值明顯高于空白對(duì)照組(P<0.05)，OD值隨濃度的增加而降低，各濃度組之間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.Ang-(1-7)呈濃度依賴性地抑制TGF-β1的誘導(dǎo)心肌成纖維細(xì)胞增殖作用。4.Ang-(1-7)在TGF-β/Smad通路的研究。 Ang-(1-7)組

5、與Ang-(1-7)+SB431542組比較，Smad3mRNA及Smad7mRNA表達(dá)差異均無有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 結(jié)論：1.外源性Ang-(1-7)對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞有一定程度地抑制作用；2.外源性Ang-(1-7)呈濃度依賴性地抑制TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞的增殖，表明Ang-(1-7)可能通過對(duì)基礎(chǔ)狀態(tài)下心肌成纖維細(xì)胞及TGF-β1刺激增殖地抑制作用而起到抗心肌纖維化的作用，其作用并非通過TGF-