MicroRNA-21對(duì)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表達(dá)的影響研究.pdf

1、目的：
　　臍血間充質(zhì)干細(xì)胞存在于人臍帶血中，具有分化能力強(qiáng)、感染性疾病檢出率低和對(duì)供體無(wú)損害等優(yōu)勢(shì)，在一定條件下可分化為心肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞等，可用于多種疾病的治療。MicroRNA（miRNA）是一類(lèi)由內(nèi)源性基因編碼的長(zhǎng)度約為18-24個(gè)核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，能夠參與細(xì)胞的多種生理過(guò)程，例如細(xì)胞增殖、分化、凋亡以及腫瘤形成。本課題旨在研究和探索miR-21對(duì)人臍血MSCs增殖和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1表達(dá)的影

2、響。
　　方法：
　?、艑?duì)臍血MSCs進(jìn)行體外分離和培養(yǎng)，探索其生物學(xué)特性和影響其培養(yǎng)的因素；⑵利用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)和western blotting技術(shù)測(cè)定人臍血MSCs中miR-21和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）的表達(dá)，并與miR-21高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比；⑶利用miR-21模擬物和抑制物瞬時(shí)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的MSCs后，利用實(shí)時(shí)PCR技術(shù)和western blotting技術(shù)測(cè)定人臍血MSCs中miR-21和轉(zhuǎn)化生

3、長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）的表達(dá)，探索其miR-21對(duì)人臍血MSCs增殖和TGF-β1表達(dá)的影響。
　　結(jié)果：
　　⑴在對(duì)人臍血MSCs進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，利用胎牛血清對(duì)培養(yǎng)瓶進(jìn)行覆蓋可以促進(jìn)細(xì)胞的貼壁；利用含5％的DMEM-LG培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)能夠促進(jìn)MSCs的增殖和純化；在對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行換液時(shí)，半量換液的效果優(yōu)于全量換液。此外，細(xì)胞離心轉(zhuǎn)速和離心時(shí)間均可影響MSCs的增殖和純化。
　?、芃iR-21在人臍血MSCs中低表達(dá)，

4、TGF-β1在MSCs中高表達(dá)，推斷抑制miR-21表達(dá)可促進(jìn)MSCs的增殖。
　?、荕iR-21模擬物可抑制MSCs增殖，同時(shí)降低TGF-β1的表達(dá)水平；miR-21抑制物則可明顯增強(qiáng)MSCs的活化增殖，促進(jìn)TGF-β1的表達(dá)水平。因此推測(cè)miR-21可能是通過(guò)調(diào)控TGF-β1的表達(dá)水平影響人臍血MSCs的增殖活化。
　　結(jié)論：
　　MiR-21模擬物可明顯抑制人臍血MSCs的增殖，同時(shí)降低TGF-β1的表達(dá)；miR