氟伐他汀對(duì)1型糖尿病大鼠腎臟肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子含量和表達(dá)的影響.pdf

1、目的：糖尿病腎病(DN)是糖尿病的主要慢性并發(fā)癥。DN以不斷的細(xì)胞外基質(zhì)積聚，持續(xù)的蛋白尿、進(jìn)行性的腎功能損害為特征，最終導(dǎo)致腎小球硬化和間質(zhì)纖維化。隨著糖尿病患病率逐年增高及患病人群的低齡化，糖尿病腎病的患病人數(shù)也逐年上升。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(HGF)是一種多功能的生長(zhǎng)因子，它參與多種細(xì)胞的增殖、遷移和形態(tài)發(fā)生。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)在DN時(shí)其血清以及腎臟局部HGF濃度有顯著變化，從而提示二者之間存在著密切聯(lián)系。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HGF是保護(hù)性因子，它

2、以自分泌、旁分泌和內(nèi)分泌的形式特異性作用于腎臟的靶細(xì)胞——腎小管上皮細(xì)胞發(fā)揮其腎保護(hù)作用。氟伐他汀是他汀類調(diào)脂藥物，屬于3-羥基-3甲基戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，可抑制膽固醇合成途徑中的限速酶——HMG-CoA還原酶活性，減少膽固醇的合成，已成為臨床上經(jīng)典的調(diào)脂藥物。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，他汀類藥物的腎保護(hù)作用并不完全依賴于它的調(diào)脂作用，它對(duì)于許多本身并無(wú)明顯血脂異常或治療前后未表現(xiàn)出降血脂作用的腎病動(dòng)物模型同樣起到了減少尿

3、蛋白、改善腎臟病理?yè)p害的作用。因此，本研究通過腹腔注射大劑量的鏈脲佐菌素(STZ)建立無(wú)明顯血脂紊亂的1型糖尿病大鼠模型，觀察DM大鼠腎臟HGF蛋白的表達(dá)以及氟伐他汀治療對(duì)其的影響，探討此類藥物獨(dú)立于調(diào)節(jié)血脂以外的腎臟保護(hù)作用及其機(jī)制。 方法: 1.雌性SD大鼠52只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，隨機(jī)選10只為正常對(duì)照組(NC組)，其余42只用于制備糖尿病動(dòng)物模型。大鼠禁食12小時(shí)后，以STZ60mg/kg腹腔注射，72小時(shí)后尾靜脈

4、采血測(cè)定血糖大于16.7mmol/L者為造模成功。 2.從成模的糖尿病大鼠隨機(jī)選取8只，作為成模0周組，造模成功后即留取24小時(shí)尿液，股靜脈采取血標(biāo)本，并摘除雙腎放入-70℃冰箱保存。其余大鼠隨機(jī)分為糖尿病模型組(DM組)和氟伐他汀干預(yù)組(DM-F組)。DM-F組每日給予氟伐他汀7mg/Kg灌胃。實(shí)驗(yàn)期間自由飲水進(jìn)食，不給予胰島素及其他任何降糖藥物。分別于第3周末、第6周末從每組中各選取8只大鼠，留取24小時(shí)尿液。股靜脈采取血標(biāo)

5、本，并摘除雙腎，測(cè)定血糖、三酰甘油(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、尿肌酐、尿白蛋白與尿β2微球蛋白(β2-MG)，并計(jì)算肌酐清除率(Ccr)。腎組織制備光鏡和電鏡切片，進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察，測(cè)定腎小球平均截面積(MGA)，計(jì)算腎小球平均體積(MGV)，測(cè)定腎小球基底膜面密度、腎小球毛細(xì)血管襻面密度。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測(cè)定血漿和腎組織

6、中HGF濃度；免疫組化方法檢測(cè)HGF蛋白表達(dá)，并記錄其IOD值。 3.所有數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，符合正態(tài)分布的指標(biāo)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(-x±s)表示，多組間比較用單因素方差分析。 結(jié)論: 1.本研究選用SD大鼠作為研究對(duì)象，采用大劑量STZ誘導(dǎo)建立糖尿病模型，此糖尿病動(dòng)物模型與人類1型糖尿病的發(fā)病經(jīng)過，胰島的病理改變及臨床表現(xiàn)等方面有許多相似之處，同時(shí)大鼠腎臟出現(xiàn)糖尿病腎病的病理變化，如腎小球

7、肥大、系膜基質(zhì)增多、基底膜增厚、足突減少和融合等。使得此種造模方法成為研究1型糖尿病較為理想的方法。 2.DM組的腎臟HGF含量和蛋白表達(dá)明顯增多，DN時(shí)HGF的一過性升高是腎臟對(duì)于高血糖等危險(xiǎn)因素的保護(hù)性反應(yīng)，避免腎臟的結(jié)構(gòu)、功能遭到破壞。但是隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，在多種因素的作用下，HGF蛋白的表達(dá)會(huì)逐漸下降。 3.應(yīng)用氟伐他汀干預(yù)后，腎組織HGF的表達(dá)及水平明顯增高，同時(shí)尿蛋白排泄減少，腎臟病理變化得到明顯改善，說明氟伐