龜膠酶解工藝及其產(chǎn)物性能研究.pdf

1、龜板為龜科動物烏龜?shù)母辜?，是中醫(yī)常用的名貴藥材之一[1]。龜膠由龜板熬制而成，為常用的補(bǔ)益中藥，具有滋養(yǎng)、強(qiáng)壯、補(bǔ)血止血、抗衰防老等功效，被歷版中國藥典收載[3]。 龜膠主要化學(xué)成為動物膠、包括氨基酸、蛋白質(zhì)、微量元素等[2]。研究表明，對龜膠進(jìn)行酶解就可以制得龜板肽。龜板肽不僅具有良好的消化吸收特性，而且還具有比龜膠更有效的生理功能作用，將龜膠酶解成龜板肽類物質(zhì)，使得龜膠有效成分更易于吸收。 本文綜述了近年來龜膠的研究

2、進(jìn)展、酶法水解研究進(jìn)展、質(zhì)譜在中藥成分分析中應(yīng)用，補(bǔ)血中藥藥效學(xué)研究；并主要研究了龜膠的酶解工藝以及酶解前后在分子量及藥效學(xué)的變化，以期能在以后的藥理學(xué)研究中獲得更好的效果。 本課題主要做了以下五個(gè)方面的的工作： 1.首先用微量凱氏定氮法測定實(shí)驗(yàn)所采用的原料龜膠的蛋白質(zhì)含量，并確定測量水解度的方法。原料龜膠的蛋白質(zhì)含量測定的結(jié)果為71.88％，比文獻(xiàn)報(bào)道的稍低; 2.以水解度為指標(biāo)，采用單因素實(shí)驗(yàn)法考察底物濃度、

3、酶加入量、酶解時(shí)間、酶解溫度、pH值五個(gè)因素對水解的影響，得出各個(gè)單因素條件的最佳值。單因素最佳條件為：酶加入量8％、底物濃度0.10g/ml、酶解時(shí)間8h、酶解溫度50℃、pH值為8.5。 3.在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L16(45)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得出工藝條件各個(gè)最佳值，并對實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析得出各個(gè)影響的因素的主次順序?yàn)椋好附鈺r(shí)間的影響最大，其次是酶解溫度，而后是底物濃度、酶加入量和pH值。正交實(shí)驗(yàn)最佳條件為:酶加入量8％、底物

4、濃度0.10g/ml、酶解時(shí)間7h、酶解溫度60℃、pH值為9.0。然后對比單因素實(shí)驗(yàn)同正交實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，對酶解時(shí)間、酶解溫度、pH值三個(gè)因素條件進(jìn)行正交優(yōu)選，用L4(23)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，得到最佳工藝條件為：酶加入量8％、底物濃度0.10g/ml、酶解時(shí)間8h、酶解溫度60℃、pH值為8.5。綜合以上研究，得到酶水解的最佳工藝條件為：酶加入量8％、底物濃度0.10g/ml、酶解時(shí)間8h、酶解溫度50℃、pH值為8.5。 4.在

5、對水解以后的樣品的分子量及其分布的研究中，采用質(zhì)譜(MS)法進(jìn)行測量。結(jié)果表明：水解前的原料龜膠的分子量主要分布在200～1500之間，含量比較大的幾種物質(zhì)的分子量主要在500～1000左右，而且分布的比較集中；水解后的樣品分子量主要分布在75～300之間，比未降解的原料有了大幅度的降低，且分子量分布也變寬。 5.在對水解以后的樣品的藥效學(xué)的研究中，進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)并測量酶解前后服藥動物血紅蛋白含量。龜膠組和龜膠酶解物組HB含量無顯