甘露醇對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療血管性癡呆大鼠行為學(xué)與海馬膽堿能系統(tǒng)的影響.pdf

1、第一部分血管性癡呆大鼠模型的制備
　　[目的]
　　探討制備理想的血管性癡呆(VD)動(dòng)物模型方法，為研究VD提供理想的動(dòng)物模型。
　　[方法]
　　將通過篩選的大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組與模型組。假手術(shù)組僅切開頸部皮膚，不結(jié)扎頸總動(dòng)脈;模型組采用間隔3天先后分別結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法制備VD大鼠模型，造模術(shù)后4周用Morris水迷宮對(duì)兩組大鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。
　　[結(jié)果]
　　造模術(shù)后4周，模型組大鼠的成活

2、率52.17％，成模率91.43％。行為學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明，血管性癡呆模型大鼠有明顯的學(xué)習(xí)記憶障礙。
　　[結(jié)論]
　　采用改良后的雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎法制備VD大鼠模型，具有高成模率、較高成活率、高重復(fù)性、癡呆癥狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可以為VD的基礎(chǔ)研究提供理想的動(dòng)物模型。
　　第二部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　[目的]
　　體外培養(yǎng)符合實(shí)驗(yàn)要求的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)并進(jìn)行鑒定，為進(jìn)行細(xì)胞

3、移植提供一定數(shù)量且功能穩(wěn)定的種子細(xì)胞。
　　[方法]
　　無菌條件下取幼年雄性SD大鼠的股骨，采用全骨髓培養(yǎng)結(jié)合細(xì)胞貼壁法分離純化BMSCs。待細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿塑料瓶底80％-90％左右時(shí)，用2.5g/L胰蛋白酶控制消化120S后，按1∶2進(jìn)行擴(kuò)增傳代。倒置相差顯微鏡下觀察原代及傳代后的細(xì)胞的形態(tài)。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物及向成骨細(xì)胞分化誘導(dǎo)后行堿性磷酸酶組織化學(xué)染色與茜素紅S染色對(duì)擴(kuò)增后的BMSCs進(jìn)行直接、間接鑒定。

4、
　　[結(jié)果]
　　大鼠BMSCs在體外可以分離培養(yǎng)擴(kuò)增，分離培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，為貼壁生長(zhǎng)的成纖維樣細(xì)胞，擴(kuò)增傳代后的細(xì)胞形態(tài)趨于均一。經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記CD44和CD90陽性率分別為89.4％和99.2％，而CD34的陽性率僅為1.82％，誘導(dǎo)BMSCs能分化為成骨細(xì)胞，堿性磷酸酶染色陽性，茜素紅S染色可見鈣結(jié)節(jié)。
　　[結(jié)論]
　　全骨髓培養(yǎng)結(jié)合細(xì)胞貼壁法可以成功體外培養(yǎng)大鼠BMSCs。

5、培養(yǎng)的BMSCs表達(dá)表面標(biāo)記CD44和CD90陽性率高，可通過誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化，具有多向分化潛能，所培養(yǎng)的細(xì)胞可用于細(xì)胞移植。
　　第三部分甘露醇對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療血管性癡呆大鼠行為學(xué)與海馬膽堿能系統(tǒng)的影響
　　[目的]
　　觀察甘露醇對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)移植治療血管性癡呆(VD)大鼠行為學(xué)及海馬膽堿能系統(tǒng)活性的影響
　　[方法]
　　將經(jīng)Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)鑒定為癡呆模型的32只大

6、鼠，隨機(jī)分為三組:
　?、俑事洞碱A(yù)處理BMSCs組（12只），甘露醇預(yù)處理后，尾靜脈注射移植BMSCs;
　?、贐MSCs組（12只），尾靜脈注射移植BMSCs;
　?、叟囵B(yǎng)基組(8只)，尾靜脈注射等量BMSCs基礎(chǔ)培養(yǎng)基;還設(shè)假手術(shù)組（7只），暴露雙側(cè)頸總動(dòng)脈但不結(jié)扎，不進(jìn)行任何干預(yù)。BMSCs移植4周后進(jìn)行Morris水迷宮試驗(yàn)和大鼠海馬內(nèi)乙酰膽堿酯酶(AChE)和膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)活性檢測(cè)。
　　[

7、結(jié)果]
　　BMSCs組大鼠移植BMSCs后，其AChE和ChAT活性均比培養(yǎng)基組有明顯提高(P＜0.05)，同時(shí)其行為學(xué)亦較培養(yǎng)基組有明顯改善(P＜0.05)。甘露醇預(yù)處理BMSCs組的AChE和ChAT活性均比BMSCs組、培養(yǎng)基組有更明顯提高(P＜0.05)，同時(shí)其行為學(xué)亦較BMSCs組、培養(yǎng)基組有更明顯改善(P＜0.05)。
　　[結(jié)論]
　　BMSCs組大鼠移植BMSCs后其AChE和ChAT活性均比培養(yǎng)基組