骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療去勢大鼠骨質(zhì)疏松的研究.pdf

1、第一部分:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的培養(yǎng)與誘導(dǎo)成骨分化及鑒定
　　背景:骨髓間充質(zhì)干細胞具有多向分化潛能，但在骨髓中含量極低，收集足夠數(shù)量的骨髓間充質(zhì)干細胞，對組織工程及細胞的體內(nèi)、外實驗至關(guān)重要。
　　目的:通過體外獲取和培養(yǎng)純度高、生物特性均一的骨髓間充質(zhì)干細胞，并向成骨誘導(dǎo)分化，為后續(xù)實驗做準備。
　　方法:通過全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，進行形態(tài)學(xué)觀察，流式細胞儀檢測細胞表面標記物，鑒定后將所

2、有骨髓間充質(zhì)干細胞向成骨誘導(dǎo)分化。結(jié)果：大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞生長以梭形細胞為主，呈放射狀排列的細胞集落，可連續(xù)穩(wěn)定傳代6代以上。第3代骨髓間充質(zhì)干細胞CD44呈陽性表達，而CD45呈陰性。成骨誘導(dǎo)后，經(jīng)茜素紅染色結(jié)果為陽性。所得細胞總數(shù)為2.0×108個，純度達99.27％。
　　結(jié)論:全骨髓貼壁培養(yǎng)法操作簡單，可大量分離、純化、擴增骨髓間充質(zhì)干細胞，所獲細胞具有間充質(zhì)干細胞的一般生物學(xué)特性，經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)后向成骨誘導(dǎo)分化，可為后續(xù)實

3、驗提供基礎(chǔ)。
　　第二部分骨髓間充質(zhì)干細胞治療去勢大鼠骨質(zhì)疏松的研究
　　目的:探討去勢骨質(zhì)疏松大鼠股骨骨髓腔注入骨髓間充質(zhì)干細胞對股骨骨密度、生物力學(xué)及骨微結(jié)構(gòu)的影響。
　　方法：將32只六月齡雌性SD大鼠隨機分為：假切（Sham）對照組12只和骨質(zhì)疏松組20只，雙側(cè)卵巢切除術(shù)后3個月兩組各隨機取4只大鼠處死后測股骨骨密度，再將骨質(zhì)疏松組隨機分成單純?nèi)荩∣VX）組及去勢+骨髓間充質(zhì)干細胞組（OVX+MSC）組各8只

4、，OVX+MSC組大鼠雙側(cè)股骨骨髓腔注入誘導(dǎo)分化的骨髓間充質(zhì)干細胞，Sham組與OVX組骨髓腔注入等量的PBS液，兩個月后取三組大鼠股骨行骨密度檢測、三點彎曲生物力學(xué)測試及骨形態(tài)計量學(xué)分析。
　　結(jié)果:
　　卵巢切除術(shù)后3個月測股骨骨密度證實造模成功，股骨骨密度檢測、三點彎曲生物力學(xué)試驗及骨形態(tài)計量學(xué)分析結(jié)果示Sham組、OVX組及OVX+MSC組組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P﹤0.05）。
　　結(jié)論:
　　股骨骨髓腔