嘗試移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠糖尿病.pdf

1、目的近幾年，各國糖尿病發(fā)病率不斷上升，據(jù)2000年第17屆國際糖尿病大會調(diào)查的結(jié)果顯示，全世界的糖尿病患者數(shù)已超過1.51億。臨床上通常采用皮下注射胰島素來治療1型和部分2型糖尿病，其治療效果并不理想，且很難阻止糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生及發(fā)展。近20年來，國內(nèi)外學(xué)者對胰腺移植及胰島移植做了大量的探索。對于已經(jīng)喪失胰島細(xì)胞功能的糖尿病患者來說，植入胰島β細(xì)胞或其替代物被認(rèn)為是最有效的方法。但供者細(xì)胞來源不足及免疫排斥反應(yīng)等限制了這種方法的應(yīng)用。

2、干細(xì)胞作為一類具有多向分化潛能的細(xì)胞，已經(jīng)逐漸成為人們治療糖尿病的新希望。 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSC)來源廣泛，取材容易，便于自體移植，且在體外長期培養(yǎng)過程中，始終保持其多向分化潛能，遺傳背景穩(wěn)定，自體移植可避免免疫排斥反應(yīng)，是理想的可供移植的種子細(xì)胞。探索人自身的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞替代治療具有廣闊的應(yīng)用前景，方法比較簡便，而且沒有倫理學(xué)和細(xì)胞來源的限制。 已有研究證實(shí)MSC移植入糖尿病大鼠體內(nèi)，在胰腺發(fā)現(xiàn)了可分泌胰

3、島素的移植的MSC。但也有研究者認(rèn)為沒有證據(jù)支持MSC在體內(nèi)能分化成胰島β細(xì)胞。在本實(shí)驗中采用了新的方法，進(jìn)一步驗證應(yīng)用骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療糖尿病的可能性。我們嘗試首先建立大鼠糖尿病模型，再將BrdU標(biāo)記的MSC移植入大鼠體內(nèi)，監(jiān)測大鼠血糖和體重變化，并觀察MSC在糖尿病鼠體內(nèi)微環(huán)境是否能向胰島β細(xì)胞分化，及其對糖尿病病情的恢復(fù)作用，為糖尿病治療提供理論基礎(chǔ)。 方法1大鼠MSC的分離培養(yǎng)和鑒定1.1無菌條件下取大鼠股骨和脛骨骨髓

4、細(xì)胞做原代培養(yǎng)。1.2免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定CD45，CD90的表達(dá)情況。 2大鼠糖尿病模型的建立2.1一次性腹腔注射鏈佐霉素建立大鼠糖尿病模型。 2.2監(jiān)測大鼠血糖以確定建模是否成功。 2.3用免疫熒光方法(Insulin抗體)檢測胰腺冰凍切片。 3尾靜脈注射移植經(jīng)過BrdU標(biāo)記的MSC3.1用BrdU標(biāo)記MSC。3.2尾靜脈注射移植MSC。 4移植后療效的檢測4.1監(jiān)測血糖和體重變化。

5、4.2取胰腺切片，免疫熒光方法檢測移植進(jìn)受體的MSC能否在胰腺存活及其是否表達(dá)Insulin。 結(jié)果1分離培養(yǎng)鑒定了大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，免疫組化CD45(-)、CD90(+)。.細(xì)胞的純化均一程度達(dá)到80％。 2建立了大鼠糖尿病模型，其血糖穩(wěn)定＞6.7mmol/L。 3經(jīng)MSC移植的糖尿病大鼠血糖有所下降，但仍高于正常水平，體重上升。在接受MSC移植的大鼠胰腺內(nèi)發(fā)現(xiàn)大量外源性MSC，大部分在胰腺內(nèi)增殖旺盛，并有