甘露醇在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療血管性癡呆大鼠模型中作用的研究--模型大鼠認(rèn)知功能及腦組織中腦源性神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)量的變化.pdf

1、第一部分大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)和鑒定
　　[目的]
　　探討大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stemcells，BMSCs)的體外分離、純化、傳代以及鑒定，為移植治療提供功能穩(wěn)定的BMSCs。
　　[方法]
　　無(wú)菌條件下取幼年SD大鼠股骨，采用全骨髓培養(yǎng)結(jié)合細(xì)胞貼壁法分離純化BMSCs。待細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿塑料培養(yǎng)瓶底80％-90％左右時(shí)，用0.25％胰蛋白酶控制消化3

2、0-60s后傳代。倒置相差顯微鏡下觀察原代及傳代后的細(xì)胞形態(tài)。通過(guò)成骨誘導(dǎo)分化方法及流式細(xì)胞儀對(duì)培養(yǎng)擴(kuò)增的BMSCs進(jìn)行鑒定。
　　[結(jié)果]
　　大鼠BMSCs在體外可分離、培養(yǎng)及擴(kuò)增。分離培養(yǎng)的BMSCs形態(tài)呈長(zhǎng)梭形，為貼壁生長(zhǎng)的成纖維樣細(xì)胞，傳代后的細(xì)胞形態(tài)趨于均一。經(jīng)誘導(dǎo)BMSCs能分化為成骨細(xì)胞，茜素紅S可見(jiàn)鈣結(jié)節(jié)陽(yáng)性，堿性磷酸酶檢測(cè)顯示，胞漿中可見(jiàn)粉紅色的陽(yáng)性顆粒。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)BMSCs的表面標(biāo)記，幾乎均一表

3、達(dá)CD44和CD90。CD44和CD90的陽(yáng)性率分別為89.4％和99.2％，而CD34的陽(yáng)性率僅為1.82％。
　　[結(jié)論]
　　全骨髓培養(yǎng)結(jié)合細(xì)胞貼壁法可以成功的建立大鼠BMSCs體外分離和培養(yǎng)體系，且培養(yǎng)的BMSCs純度高，活力強(qiáng)，性狀穩(wěn)定。BMSCs可通過(guò)誘導(dǎo)向成骨細(xì)胞分化，具有多向分化潛能。
　　第二部分血管性癡呆大鼠模型的制備
　　[目的]
　　探討制備理想血管性癡呆(Vascular deme

4、ntia，VD)動(dòng)物模型的方法，為下一步實(shí)驗(yàn)提供可靠的VD動(dòng)物模型。
　　[方法]采用間隔3天先后結(jié)扎雙側(cè)頸總動(dòng)脈的方法制備VD大鼠模型，利用Morris水迷宮檢測(cè)各組大鼠的認(rèn)知功能。
　　[結(jié)果]
　　術(shù)后4w，大鼠的成活率高達(dá)52.17％。認(rèn)知功能檢測(cè)結(jié)果表明，與假手術(shù)組相比，VD模型組大鼠有明顯的認(rèn)知功能障礙。
　　[結(jié)論]
　　改良后的2-VO制備VD模型，成功率高，重復(fù)性好，癡呆癥狀穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，可

5、以制備理想的VD模型從而用于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究。
　　第三部分甘露醇預(yù)處理后行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對(duì)血管性疾呆大鼠模型的療效觀察
　　[目的]
　　觀察甘露醇預(yù)處理后靜脈注射骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrowmesenchymal stem cells，BMSCs)對(duì)血管性癡呆(Vascular dementia，VD)大鼠認(rèn)知功能的影響及受試鼠腦組織腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(Brain-derivedneurotrophic

6、 factor，BDNF)表達(dá)量的影響。
　　[方法]
　　尾靜脈注射甘露醇（1.5g.kg-1體重）預(yù)處理10-30mins后，1×106/mL BMSCs1ml通過(guò)尾靜脈植入VD大鼠，4w后，利用水迷宮試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)方法檢測(cè)VD大鼠認(rèn)知功能以及腦組織BDNF含量變化。
　　[結(jié)果]
　　與培養(yǎng)基對(duì)照組比較，BMSCs移植

7、治療組和甘露醇預(yù)處理BMSCs移植治療組大鼠認(rèn)知功能均改善，模型大鼠逃避潛伏期縮短(P＜0.05)，平臺(tái)象限區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)（P＜0.05）;與BMSCs移植治療組相比較，甘露醇預(yù)處理BMSCs移植治療組大鼠認(rèn)知功能改善，逃避潛伏期縮短(P＜0.01)，平臺(tái)象限區(qū)滯留時(shí)間延長(zhǎng)(P＜0.05)。海馬、額葉皮質(zhì)BDNF的含量:與培養(yǎng)基對(duì)照組比較，BMSCs移植治療組和甘露醇預(yù)處理BMSCs移植治療組大鼠腦組織中BDNF表達(dá)量都增高(P＜0.0